时间：2022-05-21 08:40:04
导语：在微生物论文的撰写旅程中，学习并吸收他人佳作的精髓是一条宝贵的路径，好期刊汇集了一篇优秀范文，愿这些内容能够启发您的创作灵感，引领您探索更多的创作可能。
【摘要】植物体内大量分布的微生物对植物产生的影响已成为人们关注的热点，特别是那些有益的影响可对植物的生长及活性成分的形成产生一定的作用。甘草作为一种大宗中药，其栽培品的质量一直是人们所关心的问题，甘草有益微生物对提高甘草的品质有重要作用。该文综述了甘草有益微生物的研究进展，以期对提高栽培甘草的质量起到指导意义。
【关键词】甘草;内生菌;根瘤菌;菌根真菌
甘草是豆科甘草属(Glycyrrhiza)植物，其根及根茎为常用中药，市场需求量大。近年来，随着野生甘草资源的急剧减少，且国家明令禁止采挖野生甘草，使甘草供求矛盾日益尖锐。在这种情况下，对甘草资源的保护性利用及栽培甘草势在必行。近年来，随着人工甘草种植面积的逐年加大，提高甘草的质量成为亟待解决的一个关键问题。相关研究表明，植物有益微生物可以产生促植物生长的活性物质，提高植物固氮性能，促进植物对恶劣环境的适应，加强系统的生态平衡，保证寄主植物健康生长。因此本文就近年来甘草有益微生物的研究进展进行综述，以期对提高栽培甘草的质量有指导意义。
1甘草内生菌的研究现状
内生菌是指一生或至少一生中的某个阶段能进入活体植物组织内，并且不引起明显组织变化的真菌或细菌［1,2］。1993年，Strobel等［3］从短叶红豆杉TaxusbrevifoliaNutt的树皮中分离出二百多种微生物，其中有一株内生真菌Taxomycesandreanae能产生紫杉醇，这一研究结果引起学者对内生菌的广泛兴趣。目前，人们已经从长春花、千层塔、银杏、厚朴等多种植物中分离得到了内生菌，并取得了一些成果。
有学者对甘草内生菌也进行了研究，发现内生菌对甘草产生一系列作用。宋素琴等［4］对采自新疆的健康野生胀果甘草不同组织中的内生菌进行分离，并纯化得到149株细菌和2株真菌，鉴定得出149株细菌分属于13个属，2株真菌分属于青霉菌属Penicillium和镰刀菌属Fusarium。有学者发现内生菌可通过拮抗病原菌促进甘草生长。饶小莉等［5］从乌拉尔甘草健康植株的根茎叶中共分离到内生细菌98株，并采用平板对峙方法筛选出6株菌株，其对植物病原菌有明显体外拮抗活性，鉴定这6株拮抗菌株分属萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、Paenibacillusehimensis。龚明福等［6］采用无菌操作技术从野生健康甘草Glycyrrhizauralensis的根、茎、叶、种子、根瘤等组织中分离出内生细菌（Endophyticbacteria)125株，其中31株对棉花枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、棉花黄萎病菌(Verticilliumdahliae)具有较强的拮抗活性，这31株内生细菌分属于气芽孢杆菌属(Aerobacillussp.)、气单胞菌属(Aeromonassp.)、芽孢杆菌属(Bacillussp.)、黄单孢杆菌属(Xanthomonassp.)、假单胞杆菌属(Pseudomonassp.)、土壤杆菌属(Agrobacteriumsp.)。另有研究发现，从甘草中分离的有些内生菌还可产生活性物质。韦革宏等［7］从乌拉尔甘草和光果甘草中共分离得到68株内生菌，从中筛选出一个来自乌拉尔甘草的菌株Mesorhizobiumsp.CCNWGX022，从该菌株发酵液的石油醚提取物中分离得到了十八烷酸内酯Rhizobialide，是第一次从内生菌中得到此类物质。另有学者研究了内生菌在甘草不同部位及不同月份的数量变化趋势。林世利等［8］分离出不同月份苦豆子、骆驼刺、苜蓿、铃铛刺、甘草不同部位的内生细菌，研究阿拉尔地区豆科植物内生细菌种群动态。结果显示5月份的苦豆子和甘草植株、8月份的苜蓿植株、9月份的铃铛刺和骆驼刺植株的内生细菌的种类最多。内生细菌种类的分布规律依次为苦豆子中叶＞茎＞根＞种子＞花，苜蓿中根＞叶＞茎＞花＞种子，铃铛刺中茎＞叶＞种子＞花＞根，骆驼刺中根＞茎≥叶＞种子＞花，甘草中茎＞根＞叶＞种子＞花。5种豆科植物生长期中总带菌量平均值在各个月份变化趋势不同，并且各个月份的带菌量处于交替变化之中，说明不同月份5种豆科植物内生细菌的种类和数量不同，同种豆科植物不同组织部位的内生细菌的种类和数量有差异。
2甘草根瘤菌的研究现状
根瘤菌是与豆科植物共生，形成根瘤并固定空气中的氮气供植物营养的一类杆状细菌。这种共生体系具有很强的固氮能力。根瘤菌分快生和慢生两种类型，为化能异养菌。目前有学者已经从甘草中分离得到根瘤菌并进行了一些相关研究。
目前对甘草根瘤菌的研究多体现在根瘤菌的分类上。杨雪颖等［9］通过对西北干旱半干旱地区68株甘草根瘤菌的表型多样性和抗逆性分离研究，发现1个新类群和1个具有较高抗逆性的菌株。对新类群的中心菌株CCNWGX022和高抗性菌株CCNWGX035进行16SrDNA全序列测定及系统进化研究。结果表明，CCNWGX022和CCNWGX035与中慢生根瘤菌属内参比菌株的16SrDNA相似性分别大于96.8％和98.3％，判定它们均属于中慢生根瘤菌属。谷峻等［10］采用表型数值分类、16SrDNAPCR-RFLP分析和BOX-PCR指纹图谱分析的方法对中国北方地区的甘草根瘤菌进行表型、遗传多样性分析。供试菌株在数值分类聚类分析中约85％的相似水平上产生2个表观群，有11株菌未与已知参比菌株聚群。16SrDNAPCR-RFLP分析表明，供试的20株菌共产生14种遗传型，表现出丰富的遗传多样性。BOX-PCR指纹图谱分析进一步证明与甘草共生的根瘤菌的基因组也具有多样性。由此得出结论：在中国北方地区与甘草共生的根瘤菌在Sinorhizobium、Rhizobium和Mesorhizobium属中均有分布。
3甘草菌根真菌的研究现状
菌根是土壤中某些真菌与植物根的共生体。凡能引起植物形成菌根的真菌称为菌根真菌，大部分属担子菌亚门，小部分属子囊菌亚门。菌根真菌与植物之间建立相互有利、互为条件的生理整体，并各有形态特征，这是真核生物之间实现共生关系的典型代表。根据形态和解剖学的特征，又把菌根分为外生菌根和内生菌根两大类。有学者对甘草菌根真菌进行研究发现菌根真菌可促进甘草的生长。饶小莉等［11］分离了甘草的VA菌根，并用三叶草进行单孢繁殖，将繁殖后的菌根真菌回接甘草，结果发现接种了菌根真菌的甘草植株笔长、根粗、茎叶干重和根干重都有较大程度的提高，均比对照显著增加，并且不同处理对植株生长影响不同，得出结论接种VA菌根真菌显著促进了甘草的营养生长。JingnanLiu等［12］用两种AM菌根真菌Glomusmosseae与Glomusversiforme接种甘草，结果显示接种的甘草相对于对照组在生长的早期和晚期有显著提高，叶摄取磷的量比对照组多，并且根中甘草酸的浓度有所升高，但根部氧化酶活性相对降低了，由此得出结论接种AM菌根真菌有可能成为提高甘草药用价值的有效途径。
4甘草其他微生物学相关研究现状
近年来，对甘草微生物学转化等方面的研究工作也取得了一定成果。谢毛成［13］利用发根农杆菌的Ri质粒，以光果甘草种子胚萌发形成的实生苗不同部位为外植体，成功诱导出光果甘草毛状根，并利用TLDNA中rolC序列中的特异性引物，应用PCR技术对光果甘草毛状根进行了分子水平的鉴定，并利用理化手段对毛状根转化后产生的冠瘦碱进行了薄层定性鉴定，从不同水平上证实了光果甘草毛状根核基因组中已整合了外源Ri质粒的T-DN段。燕飞等［14］利用发根农杆菌R1601对药用植物胀果甘草(GlycyrrhizainflatBat)进行转化，诱导其产生发根。在发根诱导过程中，分别用不同菌液浓度、不同浸染时间对胀果甘草子叶、胚轴进行转化处理，统计、比较各条件下的发根率，结果表明，用稀释2倍的菌液浸染子叶8min时，发根诱导率最高,为56.49%。何晨等［15］用一株产β-葡糖醛酸酶的菌种HC-12对甘草进行液体发酵转化。通过对菌种复合诱变以及应用系统数值化及灵敏值系统调控技术优化了发酵工艺，把甘草中不足0.1%的甘草次酸的含量提高了20倍以上。经过柱层析及HPLC及1HNMR鉴定分离得到了甘草次酸纯品，并通过动物实验验证了发酵甘草于未发酵的生品对照甘草具有抗炎活性和镇痛作用显著性效果。
5小结
内生菌对甘草的有益作用体现在：①内生菌有促进甘草生长作用，内生菌可与病原菌竞争营养或直接产生拮抗物质而抑制病原菌，从而促进甘草生长。②有些内生菌可产生活性物质。③内生菌在甘草不同部位及不同月份的数量呈现一定的变化趋势。另有研究表明，内生菌能产生与宿主相同的活性物质［3］，王兴红［16］推测内生真菌可能与中药的道地性有密切的关系。这些成果对于甘草内生菌的研究有重要意义。
根瘤菌对甘草的有益作用体现在：根瘤菌能够通过与甘草共生，引起甘草根部或茎部结瘤，将空气中的N2转化为可吸收利用的NH4，从而为甘草提供氮素营养，促进其生长。
菌根真菌对甘草的有益作用体现在：甘草和菌根真菌是一种互惠共生的关系，它们之间可以交换各自所需的物质，甘草借助菌根真菌吸收水分、养分和生长促进剂，而菌根真菌也从甘草中摄取自身生长所需要的糖分和其它有机物。菌根真菌是根系的延长和扩展，且比根系吸收水分、养分的能力大得多，可促进甘草的营养生长，提高甘草的药用价值。
微生物转化对甘草的作用体现在：对甘草进行微生物转化，可提高其有效成分含量，用药效果可得到提高。
总之，微生物是个潜力巨大、尚待开发的资源，对甘草相关微生物进行研究有重大意义，有利于提高甘草的质量，对于中药的可持续发展也将起到重大作用。
摘 要 兽医微生物学实验课教学通过做好实验前的准备，加强实验室建设和管理，优化实验条件，改革实验课内容和实验课考核方式等具体措施，一定能培养学生分析解决问题的能力、独立思维和团结协作的能力，为以后的科研和工作打下良好的基础。
关键词 兽医微生物学；实验；教学改革；
兽医微生物学是动物医学临床兽医学方向和动物防疫检疫方向的主要专业基础课之一，是一门实践性很强的学科。实验可以提高学生的动手操作能力，也可以加深学生对理论课的理解，加强学生理论联系实际的能力。同时，它也为专业课动物传染病、兽医生物制品学、动物防疫检疫学、兽医寄生虫病等学科打下基础，从事畜牧兽医相关专业必须具备兽医微生物学相关的理论知识和实践技能。在执业兽医资格考试中，兽医微生物学所占比例最大，为35%。目前很多学校兽医微生物学实验课内容多为验证性实验，虽然学生在实验课上可以掌握微生物学的常规基本操作技能，但是在实践中遇到具体的问题时却无从下手。比如：如何从发病动物体内分离到病原菌并进行鉴定？如何对畜牧业相关产品进行微生物的检测？对简单的动物生物制品如何制备？为了使学生在实验课上掌握的技能充分地应用的生产实际中去，培养应用型人才，进行兽医微生物学实验教学改革是非常必要的。
1 做好实验前的充分准备
在实验前充分做好准备，能够有效提高实验的效率。实验员及其他相关人员应该对实验仪器进行定期的检查及维护。实验室中应该贴出每种仪器的使用说明和简单的操作规程及使用的注意事项，并要求学生在正式使用仪器之前先熟悉每种仪器的每个按钮的功能，熟练掌握每种仪器使用的注意事项，正确操作。另外，实验员在每节实验课前都应该认真准备该节课的实验用品及药品，不要等学生进行实验时经常找不到实验所需物品及药品。此外，在学生正式上课之前，教师及实验教师应该提前完成相关实验项目的预实验，从而检验实验药品是否可靠、实验仪器是否正常运行，明确实验环节中应该注意的问题，在给学生讲解时候能够有的放矢，保证实验课的正常运行。学生在分析实验结果时能够正确分析原因，找出实验中应该注意的细节问题，发现问题并及时解决。
2 加强实验室建设和管理，优化实验条件
1）为了丰富和完整兽医微生物实验课的内容，在教学中应该运用现代化的教学手段如多媒体和录像等，学生可直观地认识各种仪器实物，并利用录相和幻灯片的视频播放给学生演示整个实验的基本操作过程，同时也能丰富学生的理论知识，使学生的知识体系更加完善，从而顺利完成实验。如学生在制作完培养基的过程后需要及时灭菌，微生物实验室中一般都只有手提式和立式两种高压蒸汽灭菌器。而在实际工作过程中，很多单位应用的是卧式高压蒸汽灭菌器，这样就可以通过多媒体和录像给学生放映，让学生对这样的高压蒸汽灭菌器有直观的印象，丰富学生的知识面。
2）学院应在原有实验设施基础上，增加实验教学仪器的投入，如建立独立的显微镜实验室，增加显微镜的数量，提高显微镜的质量。增加PCR仪等分子生物学仪器、细菌自动化检测分析仪、电泳仪、凝胶成像系统、蛋白层析及纯化装置等先进的仪器和设备，以满足快速发展的微生物分子生物学实验方面的需要。
3）制定完善的学生实验室守则和实验室管理规章制度， 实验室工作人员以身作则，认真履行，给学生树立良好的榜样。重点强调实验室清洁以及无菌操作技术在兽医微生物学实验中的重要作用，给学生制定上实验课的课堂纪律并和期末成绩相结合，提高实验质量，规范学生的操作技能并培养学生严谨认真的工作态度。
3 实验教学内容的改革
1）根据动物医学培养方案，结合兽医微生物学课程本身的特点，及该门课程在生产和科研中的重要性，对兽医微生物学实验课教学内容进行合理的改革，主要是去掉一部分验证性实验，增加综合性、设计性实验。按照临床上病原菌的检验过程，开展设计性实验，让学生自己设计实验思路，充分调动学生的主观能动性，把实验室的基本操作和生产实际紧密结合起来，增加学生对本门实验课的兴趣。让学生充分认识到兽医微生物学实验并不是孤立的，而是一个连续不断的整体，每个验证性实验连续起来就可以解决生产实践中的实际问题，为学生以后从事临床生产实践工作打下良好的基础。
2）兽医微生物实验内容较多，但是受学时所限，课堂只能完成少部分实验内容。尤其对于实验周期较长的实验项目，不能在课堂上开展。针对上述矛盾，学校可以进行实验室开放，让学生利用晚自习和假期进行实验。这样既可以培养学生参与科研的意识，也为学生提供了自由发挥的空间，学生可以将所学知识充分的发挥，同时也可以提高学生动手操作能力和实验设计能力。有了学生的参与，减轻了承担科研工作教师的负担并培养了科研助手，使学生可以早日承担科研工作，为以后的继续学习和工作打下良好的基础。
4 实验考核方式的改革
课程考核是检验教学质量与教学效果的重要环节，是获取教学反馈信息和评定学生成绩的重要手段和方法。通过考核，可以使学生的知识转变为一个完整的知识体系，加深学生对课程内容的理解和掌握。然而，现行的兽医微生物学的课程考核仍普遍采用传统的考核方式，这在很大程度上阻碍了学生个性的发挥以及创新能力和思维能力的培养。尤其是很多学校尚未进行实验课程考核，这样不利于学生对实践技能的充分掌握。为此构建新的考核体系尤其是增加实践考核非常重要。
兽医微生物学考试改革本着从课程的自身特点和培养应用型、实践型人才的实际需要出发，有利于提高课程的教学质量，有利于促进学生自主学习，有利于形成良好的学风考风，有利于培养学生的实践能力和创新能力，有利于促进全体学生全面发展和个性发展。
制定实践考核的具体方法：分值100分，占期末总成绩的10%，考核学生实验/实践的出勤、实验操作技能、实验报告书写、学生团队协作意识。其中，学生实验课出勤，占实验总成绩的10%；操作技能、学生团队协作意识，占实验总成绩的10%；实验报告书写，占实验总成绩的40%；在实验课结束后进行实验测试，占实验总成绩的40%。
兽医微生物学实验课教学通过做好实验前的准备，加强实验室建设和管理，优化实验条件，实验课内容改革和实验课考核方式改革等具体措施，一定能培养学生分析解决问题的能力、独立思维和团结协作的能力，为以后的科研和工作打下良好的基础。
摘 要 为增强医学微生物学实验教学效果，河南护理职业学院从实验教学观念、实验教学体系和实验考核办法等方面进行一些改革探索。通过改革培养学生的创新意识，提高学生分析和解决问题的综合能力，有效提高实验教学质量。
关键词 医学微生物学；实验教学；教学方法
培养创新型人才是高等教育的重要任务，因此，不断提高学生的实践能力和创新能力，已成为各高校实验教学环节的努力方向。河南护理职业学院医学微生物学的实验课教学中进行了一些改革尝试，以提高教学质量。笔者在此谈些粗浅体会。
1 改革实验教学观念
1.1 引导学生主动预习，增强实验主动性
提前布置实验内容，要求学生主动预习并且书写预习报告，使其对实验原理有一个清晰的认识，并且明确实验操作程序。在实验课开始前，教师要针对本次实验的相关问题进行提问，这样一方面可以检查学生的预习质量作为期末考核的一项依据，另一方面可以进一步强化实验的注意事项及其关键步骤。通过要求书写预习报告的方式，不仅培养了学生良好的实验习惯，在很大程度上避免了学生稀里糊涂地动手实验以至于实验做完后还不知道自己为什么要这样做的现象，而且也减少了实验失败导致的实验材料消耗，大大提高了实验资源的利用率。
1.2 增加学生动手、动脑机会，引导学生实践创新
传统的实验教学都是实验员提前准备好所需材料，实验时也是教师演示——学生模仿的模式，学生只需被动地按规定的步骤机械操作。这种教学模式存在明显弊端：学生缺乏主动思考，实验性质偏重于验证理论，忽视思维能力的培养[1]。
为此，转变教学观念，尽量增加学生动脑、动手的机会。首先，让学生以小组形式参与实验的准备工作，比如实验材料、实验仪器的准备等，这样无形中更进一步促使学生提前预习并主动思考与实验相关的问题，培养了学生的实践动手能力；其次，在开展实验时，也是首先组织小组讨论，由学生小组自行设计实验方案，激发学生的创新思维和积极性，然后在教师的指导下完成实验。
比如，在进行细菌的分布及外界因素对细菌的影响这一实验项目时，通过让学生自己准备、自主设计的授课方式，学生不但掌握了实验操作时须注意的各种事项，培养了其发现问题和解决问题的能力，还进一步加深了他们的无菌操作意识。此外，不少学生反应以这种方式上实验课，更能激发他们的“创作激情”。
2 改革实验教学体系
2.1 调整实验课内容，引入设计性实验和综合性实验，提高学生综合素质
目前开设的实验课内容多为演示性和验证性实验，不利于学生创新能力和实践能力的培养。鉴于此，在完成基础实验技能训练的前提下，逐步引入设计性实验和综合性实验，以提高学生的创新意识和分析、解决问题的综合实验素质。如增加尿液标本、血液标本、痰液标本和脓液标本的细菌学检查等实验内容，通过临床模拟，要求学生从标本采集、培养基配制、微生物分离培养，到对所分离到的微生物进行形态特征、生理生化、血清学及毒力等方面的鉴定，均以小组为单位协作完成。这样既使学生掌握了基本的实验操作技能，而且培养了他们的实践能力和创新能力，又由于与临床工作联系紧密，进一步提高了学生的学习积极性。调查结果显示，学生普遍认为开设设计性实验是非常必要的，他们认为设计性实验虽然做起来困难大，但能极大地激发他们的求知欲，而且完成实验后有强烈的成就感，是科研工作的初步尝试。
2.2 关注前沿、联系临床，更新实验项目
针对很多学生提出所学的实验内容到临床检验能否用上以及实验室条件是否能紧跟科技发展的问题，注重更新实验项目，及时补充专业相关领域的新技术、新方法，并且定期组织学生到附属医院检验科进行学习。由临床检验人员从标本的采集分离到最后出结果，对各个步骤进行详细讲解，这样，学生不但熟悉了常用检验仪器的使用方法，而且能学到很多新技术、新方法，极大地缩短了今后进入临床工作的适应期。
3 改革实验教学方式
3.1 利用先进的实验教学手段，提高实验资源利用率
目前，运用多媒体技术辅助教学的方法在理论课上已被广泛采用，而实验课上的应用却甚少。针对这一现象，学校微生物学实验室的教师将本门实验课程的基本操作方法等内容制作成PPT或Flash课件，化复杂为简明＼变抽象为具体，直观、生动地展示给学生。这样不但有利于学生理解，而且极大地弥补了由于学生层层包围而难以看清教师示范细节等缺点，显示出传统教学无法比拟的优点。
此外，增设1台数码显微镜，可对形态典型、染色效果较好的细菌涂片等标本进行数码拍照并保存在电脑里。此后，利用计算机输出系统将典型涂片投影到大屏幕上，直接进行动态讲解。这样可以指导全体学生准确观察，极大地提高了实验资源的利用率和学生的实验观察效率，并且更进一步地促进了学生实验观察能力的提高。
3.2 改进实验室管理方式
实验教学方式采取集中教学和开放式教学相结合的方式。基础型实验主要采取统一集中教学的方式，要求全体学生掌握基本实验技能。对于综合性和研究创新性实验，则主要采取开放式教学，周一到周五实验室全时段开放，周六和周日可以预约开放，并由实验教师管理和指导。学生自行安排实验时间，自主设计实验方案，实验教师仅仅起辅助作用，负责提供实验材料和实验室安全管理工作。这样的实验室管理方式不仅使全体学生掌握了必备的实验技能，而且分层次培养了学生的创新能力，有利于学生进行初步的科研尝试。
3.3 听取学生意见，加强与学生的交流和沟通
坚持以学生为中心，从培养学生综合素质出发，进行医学微生物学实验室建设。日常教学中注重通过各种方式和学生沟通交流，听取学生建议。并且专门设置实验开设项目、实验教学方式和实验室管理意见箱，建议每位学生交一份建议或意见的书面稿。虽然有些学生的建议由于各种条件限制，无法立即解决，但诸如实验的安排、学生轮流担任一日实验管理老师等意见，则被欣然采纳。本着以学生为中心的原则，以促进学生综合素质发展和创新教育为目的，实验室的此项改革获得良好的效果。
4 改革实验考核办法
为了更加客观、公正地反映学生的实验素养，摒弃以往期末考试之前仅通过一项操作考试来记分的方法，而是采用分项记分的考核方式[2]。
1）实验预习成绩（10%）：检查预习报告，考核其对实验原理的理解和对实验内容的熟悉情况。
2）实验操作成绩（30%）：考核学生操作的规范程度。
3）实验报告成绩（30%）：主要考核学生是否认真记录实验结果，能否认真分析实验中出现的问题并发表自己的看法。
4）实验平时表现（10%）：主要通过观察日常实验，考核学生是否养成了良好的实验习惯。
5）期末成绩（20%）：不是考查对实验指导上操作步骤的记忆，而是通过要求学生自行设计并操作实验，综合考查学生的实践能力。
这种考核方式不但检验了学生实验方法和技能的掌握情况，同时使学生独立分析问题和解决问题的能力明显增强。
以上是河南护理职业学院在医学微生物学实验教学改革上做出的一些积极探索与尝试，从学生反馈的意见来看，这些改革增强了他们的实验技能，激发了他们的学习主动性和创新意识。笔者希望这些粗浅体会对同行有借鉴价值。
摘 要 兽医微生物与免疫学是动物医学专业的专业基础课，在教学过程中适合应用PBL教学模式。PBL教学模式的实施分为知识讲授、学生分组、内容的选择和问题的设计、问题解决、课堂发言，教师总结、问题解决后的反思几个环节。采用PBL教学模式，能够调动学生的主观能动性，培养学生语言表达能力、协调能力和分析解决问题的能力。
关键词 兽医微生物与免疫学；PBL；教学模式
兽医微生物与免疫学是动物医学专业的一门必修的专业基础课程，在动物医学教育中占有非常重要的地位。但是由于一直以来，各个学校都采用传统的教学模式，授课教师一般都是单纯地依靠教材来讲解兽医微生物学有关知识。由于兽医微生物学理论知识比较繁杂，各种微生物的生物学特性又存在其相似性，某些知识理论和逻辑性强，抽象难懂，学生感到难记忆并且容易记忆混乱，有些内容又会觉得枯燥乏味，这些都会直接影响到教学质量和学习效果。而兽医微生物与免疫学作为动物医学专业的一门主要专业基础课，是专业课如兽医传染病、兽医生物制品学、兽医寄生虫等的基础。为了使学生更好地掌握兽医微生物与免疫学相关知识，采用合适的教学方法非常重要。PBL（Problem Basic Learning）教学模式非常适用于兽医微生物学的教学。
1 PBL教学模式
PBL教学模式是基于问题式学习，与传统的教学模式有很大的区别。这种模式主要以问题为导向，学生为这种教学模式下的主体，主要以讨论的形式完成教学，更具有系统性、综合性和灵活性。PBL教学模式是医学院校近年来广泛采用的一种教学方法，最初诞生于美国20世纪60年代。在20世纪末期，中国大陆地区也开始采用这样教学模式。据统计，全球大约有1700所院校已经开始采用PBL教学模式，而且还有更多的院校正在积极探索在课程中采用这种教学模式。
PBL教学模式具有自主性、探究性、开放性、系统性、全员性、交互性等特点。实践证明，与传统教学相比，PBL教学模式具有如下优点：能够调动学生的主观能动性，自我学习知识；能够提高学生的语言表达能力，培养学生处理各种人际关系的能力及协调能力；能够培养学生综合分析问题和解决问题的能力以及团结协作的能力；能够使学生积极主动参与到教学中来，调动学生的积极性，活跃课堂气氛。
2 PBL 教学模式的应用与实施
根据兽医微生物与免疫学课程自身的特点，结合动物医学专业的发展状况，PBL教学方法在兽医微生物与免疫学课程上的应用大致可以分为几个环节，这些环节自成体系。
2.1 知识的讲授
在学生进行分组讨论之前，先介绍解决问题的有关知识点，尤其对于本学科发展前沿的问题，需要新观点、新理论同时结合传统的知识体系才能解决实际问题，进而培养学生的创新能力和综合分析解决问题的能力。
2.2 学生分组
将全班学生以5～7人分成若干小组进行讨论，每组安排一名组长，学生各抒己见，然后把该组的答案统一到组长，由组长把该组的答案对教师进行汇报，营造一个轻松、和谐的讨论氛围。
2.3 内容的选择和问题的设计
成功源于良好的开端。课堂上好的导入方法，能够集中学生的注意力，激发学生的好奇心和兴趣，使学生主动参与到课堂中来。因此，教师在讲授新课的过程中，首先要设置一个与本节课内容相关的问题，让学生思考。问题可以留在上一节课结束的时候，让学生下课在一起讨论，查阅相关资料，找到与问题相关的答案。这样既调动了学生主动学习的兴趣，又对新课的内容起到预习的作用，教师讲解起来让学生更容易理解。也可以在上课刚开始的时候，设置一个与本节课内容相关的问题，集中学生的注意力，一起思考讨论，活跃课堂气氛。但是问题的设置一方面要考虑到与所讲内容的相关性，另一方面要注意问题的难易程度。问题的设置不能太难，太难了学生找了很多相关资料都找不到答案，就会有挫败感；问题设置太简单，学生很容易找到答案，也会失去兴趣。
例如，在讲述免疫细胞这节课的内容时，可以设置这样一个问题：老年动物和青年动物哪个更容易患癌症？为什么？动物体的免疫系统是如何对抗癌细胞的？因为学生已经初步有了免疫学知识做基础，很容易回答老年动物比青年动物容易患癌症，主要是老年动物的免疫器官功能已经退化，不能及时行使免疫监视功能消灭癌细胞，所以老年动物比青年动物容易患癌症。那么，青年动物的免疫系统又是如何应对癌细胞的呢？其中一部分答案就在本节课所要讲述的内容当中——部分免疫细胞发挥的功能，最终将癌细胞杀灭。在正式开始讲述前，教师可以用一个图片或者动画的形式阐述机体内的几种主要免疫细胞是如何完成对癌细胞的杀灭过程的，如NK细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞可以通过ADCC作用杀灭癌细胞，T细胞可以通过释放穿孔素直接杀灭癌细胞，等等，引起学生对本节课的兴趣。教师也能引导学生从免疫学角度多方面分析机体对抗癌细胞的主要机制，从而挖掘学生的潜能和创新能力。
2.4 问题解决
学生在对教师提出的问题进行讨论的时候，可以多种方式进行讨论，提出多种可供选择的方案。在PBL教学模式中，学生要讨论的是如何获得资源以及如何利用所获得的资源解决问题。这种模式有利于培养自我学习意识以及调动主观能动性，同时也有利于培养适应社会环境的能力。
2.5 课堂发言，教师总结
课堂发言阶段是对学生PBL教学模式效果检验的一个重要环节，学生可以利用这个环节充分展示自我。通常学生在课前进行充分讨论之后，都会形成清晰的思路和观点。每个讨论小组选择一种能够最佳解决问题的方案进行汇报。每个小组由组长发言，代表小组来阐述本小组的观点和见解，小组的其他成员也可以进行适当补充。发言可以采取口头表达、辨析、板书、幻灯片等不同形式来进行。由于不同小组所获得信息来源不同，所以对于同样一个问题，也会有不同的见解，也可能是每个小组看问题的角度不同而产生的不同答案。这种汇报形式可以锻炼学生的表达能力、现场应变能力和总结能力。教师在听取了不同小组的汇报后，对问题进行归纳总结。这种集思广益的形式同时也能弥补教师的某些思考缺失。因此，PBL教学模式无疑对教师提出更高的要求，要求教师在专业知识与技能的掌握上既要有深度，又要有广度。要不断探索本专业领域的前沿知识，提高驾驭课堂的能力，解决不同的学生对问题理解的偏颇，对其进行正确的引导和启迪。
2.6 问题解决后的反思
在学生进行汇报和教师及时总结后，学生应该对上述问题做出反思。这对学生的创造性思维和自我反思能力都是一种很好的锻炼。
在近期的食品安全监管工作中，北京市食品安全监管部门抽检出5种不合格食品，并在流通领域采取停止销售措施。目前正值春夏交替之季，气温在逐步升高，各类病原微生物生长繁殖加快，政府卫生部门因此对食品的微生物检测高度重视。
中国食品受食源性致病菌污染已经十分严重，生物性危害往往通过食源性致病菌对人体造成伤害甚至导致死亡。近年来随着食品微生物事件频繁爆发，这问题已经引起政府和消费者的高度重视。食品企业一旦出现微生物污染事件，会严重影响食品企业的形象和行业地位，甚至导致企业信誉的全面破产，因此微生物检测技术理应受到企业的高度重视。
本刊记者特别采访了诺安检测宁波实验室经理毛洁红女士，探讨食品微生物检测技术的现状及发展趋势。
记者：日常生活中致病微生物主要来源有哪些？总体上看，来自微生物的食品安全事件呈现出怎样的特点？
毛洁红：消费者最可能遇到的致病性微生物主要来源于生食的蔬菜、鲜榨果汁、冷盘、熟菜、生食或未煮透的海鲜，以及冰箱里储存过久的乳、肉、糕点等食品。
一直以来，食源性疾病中由微生物导致的比例占80%。每年欧美地区爆发上千万由微生物引发的食源性疾病事件，所占人口比例高达30%。在中国，据中国疾控中心的数据显示，每年有几万起的食源性疾病事件。近年来由于中国环境污染，滥施农药、激素、抗生素等化学物质，导致食源性疾病事件数量急剧上升，使得由微生物引发的食源性疾病的比例有所下降，但依然保持在50%以上。
记者：在食品工业中如何控制微生物的含量？目前有哪些技术手段？
毛洁红：在食品工业中控制微生物最常用的手段是采用高温处理，比如饼干糕点的高温烘焙、饮料的超高温瞬时灭菌、巴氏灭菌、罐头食品的高压高温灭菌等等。餐饮店和家庭制作食品大都也离不开蒸煮、煎炒的热处理过程。
其他方法包括采用高盐高糖腌制，降低食品中的水活度，比如蜜饯制品：烘干晾晒去除食品中的水分，比如干菜，鱼干制品等等。这些是人类使用历史最悠久，最安全的控制食品中微生物含量的方法。
随着科技的发展，现在有许多新的灭菌工艺产生。比如辐照，利用放射性α、γ射线对食品进行照射处理后能立即杀灭食品中的微生物和病毒，杀菌效果非常好。但其安全性仍然有待考量。其他包括超高压灭菌、臭氧消毒、添加安全的化学防腐剂等方法来控制食品中微生物数量处于个安全的限度水平。
记者：食品中微生物检测有何意义？卫生部修订的新标准内容有何变化，存在什么问题？
毛洁红：通过对食品中微生物进行检测，可以非常准确地告知公众食品的卫生安全状况，给生产企业以明确的指导，规范企业生产出卫生合格的产品，确保消费者的健康。
日前卫生部对食品微生物的一些检测方法和一些产品的卫生标准都进行了修订。从检测方法的修订看，扩充了更多的检测方法，同时一些快速检测方法的采纳，使得更多的检测项目和方法与国际ISO标准更为接近。一些产品的微生物标准也进行了调整，比如目前争议很大的生奶菌落总数从之前的50万改为现在的200万：冷冻食品中金黄色葡萄球菌从之前的不得检出改为可以允许10个。这些调整我个人认为都是合理的，更加符合实际生产情况。
目前我国食品微生物标准以及其他一些产品标准制定存在的问题是过细，有一些微生物标准过于严格，甚至超过欧美国家，几乎每种产品都有一套微生物指标。这样就会造成目前有些微生物指标与实际生产情况不相符，过分脱离实际：有些产品微生物指标相互矛盾，比如最近争议的饮用水指标；检测方法更新了但卫生微生物指标未更新，使得新检测方法无法执行等状况出现。
建议可以参照欧洲国家只对大类产品制定微生物限度的管理办法，进行宏观管理，可以达到事半功倍的效果。食品中的微生物指标毕竟不像化学指标那样精确。
记者：食品中微生物检测的主要方法有哪些？呈现出怎样的发展趋势？
毛洁红：检测方法分为传统的微生物培养方法和快速的检测方法。传统的培养方法结果准确，但耗时比较长：快速的方法结果存在一定的假阳性率，但速度快。所以推荐企业可以更多地对其原料和生产工艺环节采用快速检测方法，从时间上满足企业生产的需要。
作为第三方检测机构和政府监管部门，本着对企业和消费者负责的态度，特别是对企业送检的最终产品我们都采用传统的培养方法，给客户最准确的结果。除非客户因为时间需要，同意采用快速检测的方法。目前我实验室采用的快速检测方法是利用DNA扩增的手段对致病菌的特征基因片段进行检测，能够在约4个小时之内找到食品中的致病菌。
近年来由于食品安全事件的频发，要求检测企业能够快速而准确的给出结果。所以，发展趋势是快速方法与传统方法并进的原则。快速检测方法作为种初筛手段是非常有效的。
记者：在食品的生产与流通领域中，微生物检测技术有何具体应用和整体解决方案？
毛洁红：食品生产企业要确保生产出品质优良，卫生可口的食品，仅仅靠最终的杀菌工艺来控制食品中的微生物是远远不够的，需要全面的控制方案，就好比我们自己家庭的厨房，要烹制出锅美味安全的食物，仅仅靠有位好厨师还是不够的。巧妇难为无米之炊，首先需要有新鲜的食材原料和配料，其次需要对原料进行恰当的清洗与处理，有设施齐全的炊具容器和卫生的环境条件，配上优秀的厨师，这样才能烹制出美味安全卫生的食物。同样，一家食品企业生产的过程也与我们家庭厨房烹制食物的流程相类似，只是其场地规模，人员数量远远比家庭厨房大得多。作为一家正规的生产企业，都会制定套完整的从基地一原料生产-包装-运输-储存-销售的食品链，包括设备、人员、环境的卫生及其质量控制，我们诺安检测服务的内容和目标就是在整个生产食品链中帮助我们的食品生产企业把控质量。从微生物方面看，我们目前的服务项目包括以下几项，这些服务项目也贯穿于整个食品生产链。
（1）原料检查：收集建立原料初始状态的微生物状况：
（2）生产中灭菌工艺验证，帮助企业选择最佳灭菌工艺：
（3）生产车间、人员、设备、仓库环境微生物控制：
（4）产品检查，控制：
（5）产品保质期验证：
（6）模拟运输，销售过程中微生物的变化，进行产品风险评估。
摘 要： 微生物学实验是生物工程、生物技术和制药工程等专业的专业基础课程。作者针对微生物学实验教学的特点并结合三本院校学生学习特点，通过对微生物学教学手段、教学模式等的思考，阐述在微生物学课程教学实践中的体会。
关键词： 三本院校 微生物学实验 实验教学 多媒体教学 设计性实验
“微生物学”是生命科学的重要组成部分，是高等院校生命科学类各专业的一门重要专业基础课。生物科学、生物技术、制药工程专业要用到微生物学，生物工程专业更离不开微生物学[1]。微生物学实验是与微生物学理论教学相配套的实验教学，是一门实践性和应用性很强的学科。开展微生物学实验的目的，是训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，加深理解微生物学理论知识，使学生能够将理论知识转化为实践，培养学生观察、思考、分析和解决问题的能力[2]。下面我结合近几年微生物学理论和实验教学实践，谈谈对微生物学实验教学的思考。
一、适当增加实验教学学时
微生物学实验是与微生物学理论相配套的基础实验课。长期以来一直被认为是附属于理论课，实验课学时不多。一般的院校，微生物学理论教学大多在54～72学时，而实验教学则多数在28～36学时。这种课程设置暴露出在教学中存在的一些普遍问题，如学生对实验课重要性认识不足，动手能力差，综合素质较低。而对于三本院校的学生，这方面的问题更普遍也更严重。相对于重点高校，三本院校学生的基础较差，学习积极性和主动性不高，而微生物学理论教学中涉及的内容较多。以赵斌等主编的《微生物学》为例，除绪论外全书有十章内容，分别为有原核微生物、真核微生物和病毒等[1]。尽管在理论教学中结合学生特点删减了部分章节的讲授，如侵染与免疫，但学生普遍反映课程知识点太多、不好记。相比而言，学生对实验课的兴趣较浓，对实验课讲授的知识掌握得较好。但是微生物学要求学生掌握的技术较多，有显微镜技术、灭菌技术、分离纯化技术等，有限的学时导致针对每一项具体的基本技能最多只能开设一次实验，甚至把几项技能综合于一次实验中。老师在具体示范后学生当场基本都能掌握实验要点。但当再次涉及相关操作时，学生就会犯很多错误。如，无菌操作存在于多个实验中，笔者在教学过程中发现在第一次教学生革兰氏染色的无菌操作要求后，多数学生在芽孢染色中仍然需要老师先做具体示范才能规范操作。学生普遍反映革兰氏染色当中涉及的操作较多，有灼烧接种环、无菌取样、固定、染色等，针对这样的问题，可以先开设无菌操作技术或单染色法。学生接受能力有限及学生学习基础较差等特点提示有必要对微生物实验课给予重新认识，提高微生物实验课的地位，并对该课程及其教学内容进行重新设置，改变微生物学实验课的从属地位。
二、合理运用多媒体教学
传统的微生物学实验教学手段通常是板书加上老师的讲解，老师讲授吃力，且仅通过语言表述，学生学习兴趣不大，很容易造成注意力不集中，同时老师需要在板书上花费大量的时间，导致能够讲授的知识有限且学生实践的时间较少，最终导致教学效果不易。与传统教学相比，多媒体技术借助图片、动画和录像等传递信息，使得讲授的知识具体形象，将一些通过传统教学手段很难表达的教学内容生动地展现给了学生。同时由于老师提前制作教学课件，将大量知识信息集中整理，突出重点，传递信息量较大，便于学生掌握及理解，解决了教学内容多而学时相对较少的困难[3]。具体来看，如讲吲哚实验时，学生对于实验原理不易理解，而在这时候通过多媒体给学生展示吲哚实验阳性的照片，学生对玫瑰吲哚有了直观形象的认识，还可以通过图片引出诸如“玫瑰吲哚为什么会集中在试管的顶部？”这样的问题，引导学生课后预习实验后续的操作。再比如在血球计数板构造的讲解时，老师可以将计数室先找到，通过连接在显微镜上的摄像头转到投影屏幕上给学生看。这样更易于学生理解，且更容易在计数时找到相应区域，既强化教学效果，又节约老师指导学生的时间。
三、尝试开展设计性实验
传统开展的微生物学实验是以教师为主导，以基础性和验证性实验为主的教学模式。学生只是跟着老师的指导和板书完成实验，没有参与到实验的设计中。特别是对于部分三本院校的学生，实验课只是简单地按照老师的步骤要求做，对实验原理和实验步骤没有进行过多的思考，导致学生的创造性思维得不到培养，学生解决问题的能力得不到有效提高。而通过设计性实验，学生成了学习的主体，教师只是从旁指导，这种学习过程有利于培养学生独立思考、发现问题的能力和创新思维[4]。因为受到实验室条件、课程学时和学生人数等的影响，我们仅在个别学期针对部分专业开展过综合性实验，如土壤中真菌的分离、纯化、鉴定，虽然该实验的设计性不是很强，但学生普遍反映通过该实验的操作既加深了对理论课堂中关于微生物的形态、微生物的营养、微生物生长及生态中相关的知识的理解，又巩固了多项实验技能，他们普遍希望能多开展这类实验。为此，今后可以尝试更多地开展综合性和设计性实验，如以分离产淀粉酶的枯草芽孢杆菌为例，让学生分组进行实验设计，并在课堂上以讨论的方式选出一个最佳方案。让学生自己准备实验试剂及器材，实验完成后可对实验过程中及实验结果进行分析讨论。这样，既能够更好地激发学生的学习兴趣，又能使他们在查阅资料、设计方案的过程中对以往知识进行复习和巩固，也培养了学生的团队协作意识，锻炼了学生各方面的能力。
总的来说，微生物学实验是一门实践性很强的专业基础课程。该课程既是对微生物学理论知识的验证和巩固，更是获得新理论、新知识的有效手段。因此，在实际实验教学工作中，在教学单位提供现代化教学仪器的设备的同时，合理的教学大纲的制定，以及指导教师自身综合素质的提高对于优化微生物学教学效果都至关重要。
摘要：为了示范推广有机肥快速发酵技术，进行了微生物菌剂对有机肥的发酵作用试验。试验设2个处理，5次重复，随机排列。结果表明，应用微生物菌剂可缩短堆肥发酵时间，提高有机肥养分含量。
关键词：微生物菌剂；有机肥；效果；发酵
微生物菌剂是指一类含有活性微生物的特定制品。微生物菌剂不像一般的肥料那样直接为植物提供养料物质，而是以微生物生命活动的过程和产物来改善作物营养条件，发挥土壤潜在肥力，刺激作物生长发育，抵抗病菌危害，从而提高作物产量和品质。有机肥料富含有机物质和作物生长所需的营养物质，不仅能提供作物生长所需养分，改良土壤，还可以改善作物品质，提高作物产量，促进作物高产稳产，保持土壤肥力，同时可提高肥料利用率，降低生产成本。充分合理利用有机肥料能增加作物产量、培肥地力、改善农产品品质、提高土壤养分的有效性。有机肥施用前必须经过充分的发酵腐熟，微生物菌剂能快速分解有机质，具有添加量少、强力降解蛋白质、发酵时间短、成本低、发酵温度不受限等优点，能有效杀死发酵物中的有害病菌、虫卵、草籽，并降解抗生素残留等。为此，笔者研究了微生物菌剂在鸡粪发酵过程中的使用方法，并验证其施用效果，为示范推广农家有机肥快速发酵技术提供参考。
1 材料和方法
1.1 试验材料
液体酵素菌含有有效活菌数2.0亿cfu/g，由承德磐丰酵素菌有限公司提供。
鸡粪来自于当地养殖户。
试验于2009年7月在河北省承德市平泉县土肥站试验田进行。
1.2 试验方法
1.2.1 试验设计
试验设2个处理，5次重复。处理1为鸡粪常规发酵，处理2为鸡粪+液体酵素菌发酵。
1.2.2 堆肥处理方法
将10 m3的鸡粪平均分成10份，其中5份用作常规发酵，5份加入液体酵素菌后发酵。
将鸡粪在水泥地上均匀铺开，取液体酵素菌100 kg，用自来水稀释100倍，放置24 h后搅拌均匀，然后均匀喷洒在鸡粪上，用铁锹搅拌，按由少到多的原则，即先将菌种稀释液倒入少量发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块，然后再将搅拌好的少量发酵原料倒入剩余发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块。将混合后的发酵原料装入水泥发酵池中，装满压实，排去空气后用塑料薄膜密封，发酵温度保持25～35 ℃。发酵到没有臭味而含有酒精味时，停止发酵，记录时间。
1.2.3 堆肥检测方法
将处理1（常规发酵）和处理2（酵素菌发酵）的鸡粪分别粉碎后过0.5 mm筛，取约0.5 kg，放入样品袋贴好标签，以备化验。按照农业行业标准NY 525-2012《有机肥料》化验鸡粪中的有机质、全氮、有效磷、速效钾等养分含量。
2 结果与分析
2.1 发酵时间比较
试验结果表明，利用液体酵素菌发酵处理的发酵过程明显缩短。常规堆肥发酵需要7 d时间，而使用微生物菌剂酵素菌发酵只需要5 d。
2.2 有机肥营养成分比较
利用液体酵素菌处理的鸡粪养分含量显著增加，养分化验结果见表1。结果表明：酵素菌发酵鸡粪中的有机质平均含量为394.56 g/kg，比常规发酵减少了44.39 g/kg，降幅为10.11%。鸡粪中的有机质含量显著降低，说明发酵过程中消耗了有机质，原因是酵素菌为化能异养菌，在发酵过程中发酵菌将消耗的有机质转化成了自身能量。酵素菌处理的鸡粪全氮含量为12.89 g/kg，较常规发酵的鸡粪（全氮含量为11.15 g/kg）增加15.61%，说明添加发酵菌后，在微生物菌剂的作用下，将鸡粪中的大分子难溶态氮转化成小分子态氮，从而提高了氮素含量。酵素菌处理的鸡粪有效磷平均含量为258.77 mg/kg，比常规处理（218.10 mg/kg）增加18.65%，说明使用酵素菌处理使鸡粪中磷素解离出来，有效磷的含量进一步提高。酵素菌处理的鸡粪速效钾平均含量增加明显，较常规处理增加38.25%。说明鸡粪经酵素菌发酵后，通过各种酶的作用将鸡粪中含有钾离子的粗纤维转化成速效钾，促使钾含量显著增加。
另外，利用液体酵素菌发酵还可有效去除臭味。在应用酵素菌对鸡粪发酵过程中，有效去除鸡粪发酵过程中的恶臭气体，减少了环境污染。
3 结论
使用微生物菌剂酵素菌对鸡粪进行发酵处理，既达到了高温堆肥的目的，又缩短了堆肥腐熟时间，加快了鸡粪的无害化处理过程，消灭了病原微生物，并且能够提高鸡粪的主要养分含量，全氮平均含量较常规对照增加15.61%，有效磷增加18.65%，速效钾增加38.25%。酵素菌在发酵过程消耗有机质，将难溶态的N、P、K解离出来，从而较常规发酵的鸡粪更加优质。同时还有利于消除致臭物质，减少对环境的污染。
使达利”牌复合微生物肥是根据微生态学和植物营养学的理论，按照平衡施肥技术和肥料配方技术的要求，利用生物工程技术以农业废弃物为主要原料，对传统化学肥料进行改性深加工后形成的新一代高科技绿色环保肥料。“复合微生物肥”具有改良土壤、促进农作物生长、提高农作物产量、改善农产品品质、减少环境污染和大幅度降低农产品有害物质残留等作用，为了验证其在玉米生产中的作用，今年我们承担了黑龙江省农业技术推广站的试验任务，在双城市双城镇长勇村农业技术推广中心试验地进行了试验研究，处理亩产706.1公斤，比对照每亩656.4公斤，增产49.7公斤，增幅7.57%。现将试验情况详细总结如下：
一、试验材料与方法
（一）、试验材料：
1、供试材料：“复合微生物肥”由“使达利”肥料有限公司生产提供，黑龙江省农科院提供技术支持。
2、供试作物：玉米
（二）、试验方法
试验采用大区对比法，不设重复，设1个处理，处理面积667m2。
处理：25%复合微生物肥亩用量40公斤。
对照：45%鲁西复合肥亩用量25公斤。
（三）试验地点：双城市农业技术推广中心试验地
二、试验记录与调查
1、地块基本情况调查
2、物候期调查：
3、田间调查及考种分析：
4、产量结果调查：
三、试验总结分析
通过一年的肥料对比试验，“使达利”牌复合微生物肥表现较好，体现以下四个方面：一是物候期较有改观，拔节、抽雄、吐丝提前，1天，成熟提前2天；二是抽雄期玉米长势好于对照，株高增加4厘米、茎增粗0.1厘米、叶宽多0.5厘米，平方米叶面积增加0.13511，气生根增多了0.5轮、增加了5条。三是构成产量的因子有一定的提升，平均穗长增加0.5厘米、穗粒数增多6粒、百粒重提升2.1克、籽粒含水量降低9.7个百分点、单产提高49.7公斤，增产幅度7.57%。四是每亩产值增加99.40元，扣除增加的成本37.25元，每亩纯增效益62.15元。
四、结论
经过一年的实践，“使达利”牌复合微生物肥，对改良土壤、促进农作物生长、提高农作物产量、发挥了作用，初见效果，主要表现第一、使用“使达利”牌复合微生物肥，对玉米的物候期有了改善，均比对照提前1—2天，较有变化；第二、在玉米抽雄期植株增高4厘米以上、茎粗增加、叶片增宽、叶面积指数提高，地下部根系发达，地上地下长势均好与对照；第三、构成产量的因子有较明显的提升，平均穗长增加0.5厘米、穗粒数增多6粒、百粒重提升2.1克、籽粒含水量降低9.7个百分点、单产提高49.7公斤，增产幅度7.57%。四、 效益较理想，即每亩纯增效益62.15元。通过上述数字反映，“使达利”牌复合微生物肥对玉米生长发育有一定的改善，产量效益也有所提升，希望生产厂家能够根据微生态学和植物营养学的理论，进行产品质量升华，按照平衡施肥技术和肥料配方技术的要求，利用生物工程技术以农业废弃物为主要原料，真正做到对传统化学肥料进行改性深加工，最后形成新一代高科技绿色环保肥料，即“使达利”牌复合微生物肥，应用于龙江大地，建议明年增加试验点次，扩大示范面积，为今后大面积推广应用“使达利”牌复合微生物肥提供科学依据，为实现粮食增产，农民增收，振兴农村经济，造福龙江百姓做出应有的贡献。
（作者单位：150100黑龙江省双城市农业技术推广中心）
摘要：本文探讨了基层实验室进修人员、实习学生的带教方法，对多年的带教经验、心得、体会进行回顾和总结。带教老师应具备“责任心”、“耐心”、“匠心”以及“诚意”和“善意”，同时还应结合其他具体方式，才能较快较好地让学生掌握到知识。带教工作是一门科学，作为带教老师应不断学习和总结，探索出更科学有效的教学方法，从而做好带教工作。
关键词：带教方法；基层微生物实验室；进修；实习
实习或者进修，对于毕业生或者资历尚浅的专业技术人员来说都是一种非常重要的人生经历，它是理论应用于实际工作的首次尝试，是学生接触社会的初步体验，也是技术人员增长见识、提高技能的重要手段。本人从事微生物检验工作已有十多年，每年都有不少检验专业的学生或者其他单位的技术人员前来实习、进修，在多年的带教工作中，总结了一些方法，积累了一些经验，现提出来与同行们一同探讨，相互学习，共同进步。
一、面对实习、进修人员，带教老师应该具备“三心两意”
1.作为带教的老师，我们对学生应该要有较强的“责任心”。学校将学生交给我们，就是让我们能把更多有用的知识、技能传授给学生，好让他们毕业后能更快、更好地适应各自的工作岗位，因此，我们要对他们认真负责。
2.带教老师要有“耐心”。书本上的理论知识与实际工作往往有一定差距，学生对实际操作的原理与要点往往是一知半解，带教的老师通常要反复解释，他们才能理解，所以耐心讲解是必不可少的。
3.我们还需要有“匠心”。微生物检验是一门技术性很强的工作，带教工作也需要讲究方法和技巧，学生才容易理解和掌握。具体方法在下面作详细介绍。
4.带教老师面对学生还应该有“诚意”和“善意”。我们指导学生，其实也是一种相互沟通、互相学习、互为促进、共同提高的过程。我们教会他们某些专业上的技能，而他们会给我们传递许多有用的信息；同时在教学过程中，学生会促使我们不断学习，提高自身专业技术水平，以满足带教工作的需要。因此，带教老师对学生应当是以诚相待，倾囊相授。而对于学习过程中学生可能出现的厌学或过失，我们则应提出善意的批评，循循善诱，而不应对其枉加指责，避免他们对学习失去兴趣。
二、带教微生物检验的常用方法
1.提问式教学。学生对书本上的知识理解并不深刻，而且往往不知道哪些是重点。因此，我们在带教过程中可以提出一些问题，如“志贺氏菌的增菌液是什么”、“沙门氏菌的抗原分哪几种”、“伤寒沙门氏菌Vi抗原为什么会阻碍O凝集”、“大肠菌群的定义和卫生学意义是什么”等等。当他们答不出来时，我们会让他们去查书，查不到时我们才给他们解答。这样做不但可以引起学生们的兴趣，同时让他们知道看书时哪些知识点是重点，必须掌握。通过自己查书和老师解答，会给他们留下较深刻的印象，掌握得也较为牢固。
不同的教学方法是以不同的学习理论、教学理论为基础的，教师应注意学习有关理论，特别是现代学习理论，它是教学方法设计的重要的理论基础。
根据教学目标和教学内容，有侧重地渗透一种或几种科学方法教学，如实验、观察、测量、比较、分类、归纳、演绎、类比及模型方法等。可以通过生物科学史教学，介绍科学家发现问题的方法和思维过程，如光合作用的系列经典实验及研究方法，或创设学习情景，如科学家发现问题的过程，让学生体会、模仿。实验教学是实施科学方法教育的重要途径。生物学是一门实验性科学，每个生物学实验中都蕴含着科学方法与科学思想。因此，在生物科学教育中，重视实验教学，不仅进行操作技能的训练，如显微镜的使用、装片的制作、标本的采集制作等，更重要的是让学生掌握通过观察、发现并提出问题—作出假设—制订实验计划—实施计划—得出结论—表达、交流等一系列科学研究的程序，提高学生科学工作的过程技能。围绕重要概念这一教学目标、教学重点，采用有效讲授、演示、资料的分析、小组讨论、探究活动、动手实验等多种教学形式与学习活动，帮助学生通过必要的生物学事实构建概念、理解概念、应用概念，进而形成知识体系，为学生能够在新情境下解决相关问题奠定基础。这样的教学才能避免学生死记硬背生物学事实，体现生物学科的科学课程性质。
2.专题性、针对性讲解。除了在日常工作中带教学生，如果有时间的话，我们还会给学生作一些简短、新颖的专题讲座。如“食物中毒的检验程序”、“不同细菌分离鉴定所需要的各种培养基”、“NDM-1泛耐药菌的抗药机理及流行状况”、“分子生物学检测方法”等。这样做大大开拓了学生们的视野，增长了他们的见识。
3.多观察，及时发现学生实验操作中的不足或失误。在带教进程中，我们会经常留意学生们的操作是否正确，发现不正确的，则即时给予纠正。例如，我们有时会发现学生用接种针挑取细菌接种液体培养基时，他们会将接种针在培养基中直接大力地搅拌。这时，我们会给他们指出：这样做是不符合生物安全要求的，在液体培养基中大力地搅拌很容易产生气溶胶，如果所接种的是呼吸道的致病菌，则存在呼吸道感染的危险。同时，我们会教他们正确的接种方法。
4.常用标准菌株进行示教。形态鉴别对微生物学检验是非常重要的。通过观察平板上细菌的菌落形态，来初步推测它是什么菌，对细菌的鉴定是最基本最、重要的手段，但也是最难掌握的。我们常对学生说，只有对各种致病菌的菌落形态了如指掌，你才能做到当众多杂菌同时存在时还能准确地找到它。因此，我们经常会将手头各种标准菌株划线分离接种在各种琼脂平板上，让学生们掌握它们的形态。
5.进行质控考核。用未知菌种对学生们进行质控考核，对提高他们的检测水平有重要的意义。通过质控考核，能让学生们初步掌握某种细菌的检定程序，并且在在鉴定过程中会遇到很多问题他们会想办法去解决，去翻书查资料，从而学会很多技巧和知识；而当准确鉴定出某种细菌后，他们会有成就感，也大大增强了他们的自信心和对检测工作的兴趣，对今后的学习也更有热情了。
三、带教过程中应注意的的问题
1.带教老师应该有扎实的专业知识和技能。作为带教的老师，自己应当尽可能精通本专业的相关知识和业务，只有这样才能指导好学生。在教学过程中，学生常常会问一些看似简单却不好回答的问题，如果平时没有关注，是很难作答的。例如有学生会问，沙门氏菌在接种改良克氏双糖铁琼脂时，为什么底层变黄并有黑色沉淀生成，而斜面则变红且没有黑色沉淀生成？对这个问题，如果你不熟悉改良克氏双糖铁琼脂的成分和原理，是根本答不上来的。
2.给学生做质控考核前最好自已先做一遍，做到心中有底。如果要给学生做未知菌的质控考核，事先最好把菌株做一下，看看菌种的各项生物性状有没有发生改变。因为菌种传代超过五代后，它的菌落形态、凝集效果等有可能会发生改变。要是拿这样的菌株给学生做质控考核，效果就不太理想了。
以上是本人多年实验室带教工作的一点心得体会。带教工作其实是一门科学，本人还将在今后的带教工作不断学习和总结，希望能探索出一些更科学有效的教学方法，使学员们能更快、更好地掌握微生物检验的知识和技能。
微生物源农药的研究发展迅速，它已成为重要的杀虫剂，而B.t和阿维菌素是当今防治技术中应用最广的两种微生物源药剂，它们的杀虫机理都是使害虫生病死亡。尽管其应用效果受环境影响大，防治暴发性害虫差，但因其生物活性高，不容易产生抗药性，选择性强，不伤害天敌、对人畜毒性低，无残留，不污染环境等优点，越来越受到绿色生产基地首选的无公害农药。
1 B.t杀虫剂
1.1性能与特点
B.t是苏云金芽孢杆菌的简称，又名杀螟杆菌、青虫菌、7216、82162等，是一种细菌性微生物杀虫剂。杀虫有效成分是由产晶体芽孢产生的3种毒素，对害虫仅有胃毒作用。害虫食入药剂后，在中肠内，使肠道在几分钟内麻痹，停止取食；并破坏肠道内膜，进入血淋巴，使害虫饥饿和出现败血症而死亡。药效较缓慢，一般害虫取食后1至2天才见效，残效期10天左右。
1.2剂型
有100亿活芽孢悬浮剂；100亿活芽孢可湿性粉剂。
1.3防治对象和使用方法
主要用于防治特定的鳞翅目幼虫及某些地下害虫。可用来防治尺蠖、刺蛾、夜蛾、天蛾、毛虫类等，但对毒蛾、灯蛾效果差。在低龄幼虫期使用，治虫保叶效果较好，使用浓度为1500-2000倍液均匀喷雾。
1.4注意事项
1.4.1 B.t可湿性粉剂杀虫见效速度较慢，用药时间应比化学农药提前2至3天。它本身是一种细菌，所以不能和内吸杀虫剂或杀菌剂混用，但可和低浓度拟除虫菊酯类农药混用，可提高防效。在菌液中加入0.1%洗衣粉，能增加其粘着力。
1.4.2本药剂对蚜虫、螨类等刺吸式口器害虫无效。药液要现配现用，以免失效。
1.4.3本药剂对家蚕、蓖麻蚕毒性大，不可在桑园及养蚕场所使用，严防污染蚕食和蚕具。
1.4.4 B.t药剂在气温较高（20℃以上）时使用效果好，常在6-9月份使用。温度低到一定程度，会使该药完全失去杀虫效果。在25℃～30℃时使用，其防效比10℃-15℃时高出1-2倍。因此，温度低于20℃时最好不要使用。
1.4.5环境湿度越大，其防效发挥得好。尽管湿度上升易引起病害，但粉状B.t中只有在高湿的条件下才能发挥药效。因此，喷洒粉剂农药宜在早晚有露水时进行，以利于菌剂粘附在茎叶上，并促进芽孢繁殖，增加与害虫接触的机会。
1.4.6强烈阳光中紫外线对细菌芽孢有破坏作用，中到大雨会冲刷喷洒在植株茎叶上的药液，降低防治效果。如果在喷药后下毛毛雨，有增加防治效果作用。为保证药效，使用时一定要注意天气预报，保证施药后1-2天内无中到大雨。因此，应选择晴天傍晚、阴天或微雨天施药。喷药后如遇大雨，则需补喷。使用时最好是在阴天或晴天下午4时以后。
2阿维菌素杀虫剂
2.1性能与特点
阿维菌素又叫齐螨素、爱福丁、阿巴丁、阿佛米丁、阿佛曼菌素等，是由阿佛曼链霉菌经液体发酵、提取等工艺生产的抗生素类杀虫杀螨剂。
2.1.1高效、广谱，一次用药可防治多种害虫。
能防治鳞翅目、双翅目、同翅目、鞘翅目等，杀虫谱有84种，我国多用来防治虫体小、世代多、易出现抗药性的害虫如梨木虱、棉蚜等，潜叶性的害虫如美洲斑潜蝇等，害螨如二斑叶螨、茶橙叶螨、山楂叶螨和寄主广、食性杂的害虫如小菜蛾等。
2.1.2杀虫机制独特，持效期长。
阿维菌素是一种神经毒剂，干扰昆虫体内神经末梢的信息传递，致使神经膜处于抑制状态，从而阻断神经未梢与肌肉的联系，使昆虫麻痹、拒食、死亡。阿维菌素在喷施后能渗入作物叶片组织中，表皮薄壁细胞内形成药囊，长期贮存，所以，阿维菌素有较好的持效期。
2.1.3害虫不产生抗药性，与其他杀虫剂之间不产生交互抗药性，对抗药性害虫有特效。
因为阿维菌素是大分子化合物，害虫不易产生抗药性；它的杀虫原理特殊，与其它农药无交互抗性，即使对有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯杀剂产生抗药性的害螨、潜叶蝇、潜叶蛾以及其他钻蛀性害虫或刺吸式害虫等常规药剂难以防治的害虫仍具有高效。
2.1.4对天敌和环境安全。
因施药后，未渗入植物体内的而停留在植物体表面的药剂可很快分解，对天敌损伤很少。阿维菌素在土壤和水中易降解，并在土壤中被土壤吸附，不会淋溶，无残留，不会污染环境；在生物体内也无积累和持久性残留，所以阿维菌素属于无公害农药。此外，阿维菌素还可以通过土壤微生物分解成具有更高活性的衍生物，还可对植物线虫产生杀虫作用。
2.2剂型
现在常用的剂型有1.8%乳油，此外还有0.9%和0.3%的剂型。
2.3、防治对象和使用方法
阿维菌素主要用于花卉、果树、蔬菜、烟草棉花等作物防治棉铃虫、菜青虫、潜叶蝇、蚜虫、木虱、桃小食心虫、以及叶螨等，一般用1.8%乳油2000-4000倍液喷雾；防治土壤根结线虫，一般每667m2用1.8%乳油600-900ml效果极好。
2.4注意事项
2.4.1害虫取食阿维菌素生物农药后有1-3d的不食、不动、不死的中毒过程，所以要抓住防治适期，在害虫幼虫盛发前期用药，以达到较好的防效。
2.4.2与其他药剂轮用或换用，可以延缓其抗性发展。
2.4.3使用增效剂，如在防治马铃薯甲虫和二斑叶螨时可以增加多功能氧化酶抑制剂Pbo或酯酶抑制剂DEF，以提高防效，抑制抗性。
2.4.4加增效油，大多数植物油、矿物油对阿维菌素有不同程度的增效作用，可以减少阿维菌素的用量。
2.4.5阿维菌素药效缓慢，应正确使用，不要随意加大用药量。此药是以触杀和胃毒作用为主，要将药剂与水混匀，并均匀喷雾在植株上。
2.4.6阿维菌素对蜜蜂、某些鱼类毒性较高，所以用药时尽量避开花期和污染鱼池。
2.4.7阿维菌素原药对人畜毒性高，制剂对人畜毒性中等，若误服，可服用吐根糖浆或麻黄素解毒。
总之，随着人类对环境保护和自身健康的日益关注。清洁、绿色、健康、环保的生活成为人们自觉的选择和追求与人们日常生活息息相关的高效、安全的生物农药必将成为农药产品中的主力军。
（作者单位：164321黑龙江省红色边疆农场）
微生物肥料的主要优点是可以改良土壤，不污染环境，无毒副作用，是生产“绿色食品”的理想肥料。将微生物肥料使用在种子和土壤上，可以增进土壤肥力，协助植物吸收营养，增强植物抗病和抗旱能力，节约能源，降低生产成本，减少环境污染。
一、微生物肥料的分类
1、固氮菌肥料
可以自由生活的固氮的微生物为菌种生产出来的固氮菌肥料。按照菌种和特性可分为自生固氮菌肥料，根际联合固氮菌肥料，复合固氮菌肥料。固氮菌肥料可用于各种作物，尤其是禾本科作物与蔬菜中的叶菜类作物，可作基肥，追肥，和种肥。
2、根瘤菌肥料
用于豆科作物接种，使豆科类作物结瘤、固氮的接种剂。复合根瘤菌肥料以根瘤菌为主，加入一些能促进结瘤、固氮作用的芽胞杆菌、假单胞细菌和其他有益的促生微生物的根瘤菌肥料，叫做复合根瘤菌肥料。加入的促生微生物一定要对人畜及植物无害的菌种。
3、硅酸盐细菌肥料
是说在土壤中通过硅酸盐细菌的生命活动，增添植物营养元素的供应量，刺激作物的生长，抑制有害微生物的活动，对作物有一定的增产效果的微生物制品。
4、磷细菌肥料
按菌种及肥料的作用特性分为两种，一种是有机磷细菌肥料，另一种是无机磷细菌肥料。有机磷细菌肥料是说在土壤中能分解有机态磷化物（卵磷脂，核酸，植素等）的有益微生物发酵而制成的微生物肥料。而无机磷细菌肥料是说能把土壤中惰性的不能被作物直接吸收利用的无机态磷化物，溶解转化为作物能吸收利用的有效态磷化物。
二、微生物肥料的好处
1、分泌生长激素
很多微生物种类在生长繁殖过程中产生对植物有益的代谢产物，如生长素，吲哚乙酸，赤霉素，多种维生素，氨基酸等等，可以刺激和调节作物生长，使植物生长健壮，营养良好，从而达到增产的效果。
2、改善作物品质
是指微生物肥料的主要功效，各种自生、联合和共生的固氮微生物肥料，能增加土壤中的氮素采源。多种分解磷、钾矿物的微生物，如一些芽孢杆菌、假单胞菌的使用，能将土壤中难溶的磷、钾溶解出来，转变为作物可以吸收利用的磷、钾离子，使作物生活环境中的营养充分。由于微生物肥料能提高土壤的养分含量，因此在同样地力水平的土壤上能减少化肥的用量，并且获得等效的增产效果。使用微生物肥料能提高农产品品质，如蛋白质、糖、维生素等含量的提高。
3、曾强作物抗病与抗旱能力
多种微生物能诱导植物的过氧化物酶，脂氧合酶，多酚氧化酶，苯甲氨酸解氨酶，几丁质酶等参和植物防御放应，利于防病抗病，有些微生物种类还可以产生抗菌素类物质，有的则是形成了优势种群，减少了作物病虫害的发生。菌根真菌由于在植物根部的大量生长，它的菌丝除可为植物提供营养元素外，还能增加水分吸收，有利于提高植物的抗旱能力。
三、微生物肥料的应用前景
1、适用品种多
适合施用微生物肥料的作物种类繁多，各种豆科作物、经济作物、粮食作物、蔬菜瓜果等都能应用微生物肥料提高产量、改善品质。
2、生产无公害绿色食品
无公害的绿色食品对目前的农业提出了更高的要求。随着绿色农业的发展，生产安全、无公害的绿色食品已经成为一个发展趋势；并且由于大量使用化肥，土壤质量下降，土壤物理性质恶化，地下水污染等众多问题日益突出。
3、微生物肥料本身的发展奠定了基础
通过筛选优良菌种、改进生产设备和生产工艺，为生产优质的微生物肥料创造了有利条件，而且基因工程新菌株的出现让微生物肥料的广泛应用成为可能。目前兴起的植物根际促生细菌（PGPR）的研究和开发，更为微生物肥料的应用开辟了广阔前景。
四、推广应注意的问题
1、应使用获得国家登记证的微生物肥料。国家规定微生物肥料必须要经农业部指定单位检验和正规田间试验，充分证明它的效益、无毒、无害后由农业部批准登记，而且先发给临时登记证，经3年实际应用检验可靠之后再发给正式登记证。正式登记证有效期只有5年。因此。没有获得国家登记证的微生物肥料，质量很可能有问题，不要大面积推广使用。
2、不要使用过期的微生物肥料。由于技术水平的有限，目前我国绝大多数微生物肥料的有效菌成活时间超过1年的并不多，所以一定在有效期内尽快使用，越早越好，过期的微生物肥料效果肯定有影响。
3、要使用有效活菌数达标的微生物肥料。国家规定微生物肥料菌剂有效活菌数≥2亿个/g，大肥有效活菌数≥2000万个/g，而且应该有40%的富余。如果达不到这一标准，就不要使用，说明质量不过关。
4、必须要正确存放和使用。微生物肥料中很多有效活菌是不耐高低温和强光照射，不耐强酸碱，不能与一些化肥和杀菌剂混合，所以推广应用微生物肥料一定按产品说明书进行科学保存和使用。
（作者单位：152100黑龙江省望奎县灵山乡农牧业技术服务中心）
一、食品微生物检验概述
食品微生物检验是应用微生物学的理论与方法，研究外界环境和食品中微生物的种类、数量、性质、活动规律、对人和动物健康的影响及其检验方法与指标的一门学科，是近年来形成的微生物学的一个分支。食品微生物检验，侧重于有害方面，重点研究食品的微生物污染、检测范围、卫生指标、检验方法等。
（一）食品微生物检验的范围
食品微生物检验的范围包括以下几个方面。
1.生产环境的检验
2.原辅料的检验
3.食品加工过程、贮藏、销售等环节的检验
4.食品的检验
（二）食品微生物检验的指标
1.菌落总数
菌落总数是食品检验经过处理，在一定条件下培养后1g/lmL或1cm2（表面积）检验中所含细菌菌落的总数。
2.大肠菌群
大肠菌群是指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌。
3.致病菌
致病菌既能够引起人们发病的细菌。食品中不允许有致病菌存在，这是食品卫生质量指标中必不可少的标准之一。
4.霉菌及其毒素
鉴于有很多霉菌能够产生毒素，引起疾病，故应该对产毒霉菌进行检验。例如曲霉属的黄曲霉、寄生曲霉等，青霉属的橘青霉等。
二、鲜肉中微生物污染
1.宰前微生物的污染
（1）健康动物的体表及一些与外界相通的腔道，某些部位的淋巴结内都不同程度地存在着微生物，尤其在消化道内的微生物类群更多。
（2）有些微生物也可经体表的创伤、感染而侵入深层组织。
（3）患传染病或出于潜伏期或带菌（毒）者。
（4）动物在运输、宰前等过程中的微生物的传染。
2.屠宰过程中微生物的污染
（1）健康动物的皮肤和被毛上的微生物，其种类与数量和动物生前所处的环境有关。宰前对动物进行淋浴和水浴，可减少皮毛上的微生物对鲜肉的污染。
（2）胃肠道内的微生物有可能沿植物间隙侵入邻近的组织和脏器。
（3）呼吸道和泌尿生殖道中的微生物。
（4）屠宰加工场所的卫生状况。如生产用水、屠宰加工车间的设备。
三、食品的腐败变质
1.温度：低于4摄氏度或高于65摄氏度都不太利于细菌繁殖
2.水分：非常重要的因素，含水量较高的食品相比之下更容易腐败
3.含盐量：其实就是渗透压，细菌一般不喜欢高盐环境
4.有人提到酸碱性，情况很少，因为是与人吃的东西，其酸碱性也很适于细菌繁殖。
四、食品中菌落总数的测定
（一）设备和材料
1.主要设备：温箱36±1℃；冰箱0-4℃；恒温水浴46±1℃；天平；电炉；吸管；广口瓶或三角瓶：容量为500mL；玻璃珠：直径约5mm平皿：直径为90mm试管；放大镜；菌落计数器；酒精灯；均质器或乳钵；灭菌刀或剪子；试管架；灭菌镊子。
2.培养基和试剂：营养琼脂培养基；磷酸盐缓冲稀释液；生理盐水；75%乙醇
（二）实验方法
1.检验程序：
（1）检样
（2）做成几个适当倍数的稀释液
（3）选择2-3个适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌培养皿内
（4）每皿内加入适量营养琼脂
（5）菌落计数
（6）报告
2.检样稀释及培养
（1）以无菌操作，将检样25g（或mL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8 000-10 000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。
（2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀。做成1：100的稀释液。
（3）另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液
（4）根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。
3.菌落计数的报告
为适应社会发展的需要，食品微生物检验必须向自动化检验和快速检验的方向发展，其趋势是灵敏度高、特异性强、重复性大、快速、简便和经济等。随着分子生物学和微电子技术的发展，快速、准确、特异检验微生物的新技术、新方法不断涌现，微生物检验技术由培养水平向分子水平迈进，并向仪器化、自动化、标准化方向发展，提高了食品微生物检验工作的高效性、准确性和可靠性。
（作者单位：150500哈尔滨市呼兰区职教中心）
微生物肥料是指一类含有活性微生物的特定制品剂，种类繁多、功能多样，研究和应用的潜力巨大，因此它在我国农业可持续发展中发挥着不可替代的作用。但是微生物肥料在使用中还存在一些问题，本文主要从微生物肥料的概念、种类、作用、应用现状及存在的问题、建议以及发展趋势等六方面进行说明，以供参考。
一、微生物肥料的概念
微生物肥料又称接种剂，菌肥或生物肥料等，是一种含有特定微生物活体的制品，被广泛应用于农业生产中，它通过其中所含微生物的生命活动，来增加植物养分的供应量，从而发挥肥效的作用。
二、微生物肥料的种类
微生物具有资源丰富、种类繁多等特点，由微生物制出的肥料品种也非常多，如第一类：细菌类肥料 、 放线菌类肥料 、 真菌类肥 料；第二类：单一微生物肥料、复合微生物肥料；第三类：固氮菌类肥料 、 解磷菌类 肥料 、 解钾菌类肥料 （ 硅酸盐细菌） 、 抗生菌肥料 、 菌 VA 根真菌肥料 、 堆肥菌剂和发酵菌剂等。其中第一类微生物肥料是按照微生物种类划分的；第二类微生物肥料是按照制品内含物划分的；第三类是按照作用机理划分的。由此可见，使用者在使用微生物肥料时，具有选择范围广，作用性强等特点。但是需要注意的是，由于微生物肥料种类繁多，使用者在选择前一定要对每种肥效了解透彻，以免造成错误使用。
三、微生物肥料的作用
微生物肥料具有其它普通肥料不可替代的作用。本文主要以固氮菌肥、解钾菌肥、5406 菌肥、植物根际促生菌 （ PGPR）、解磷菌肥等五种微生物肥料为例，简要分析其作用。
1. 固氮菌肥的作用
固氮菌肥主要是利用微生物自身或联合固氮菌固定空气中的氮素来发挥作用的，从而提高土壤中速效氮含量，发挥固氮菌对农作物的作用。
2. 解钾菌肥的作用
解钾菌肥主要是利用胶质芽孢杆菌发挥作用的，这种菌能够分解土壤中的云母、长石等钾铝硅酸盐及磷灰石，从而释放对植物生长有效的矿质成分，促进土壤肥力的增加。
3. 5406 菌肥的作用
5406 菌肥是通过细黄放线菌可分泌抗菌物质和刺激素来发挥作用的，从而达到抑制作物病害，促进作物健康生长的目的。
4. 植物根际促生菌肥的作用
植物根际促生菌简称PGPR，又名增产菌或多效菌剂。它是通过植物根部生长大量的有益菌来发挥作用，从而促进作物对对矿质营养的吸收和利用，还可以促进植物的新陈代谢，抑制病原菌的产生。
5. 解磷菌肥的作用
解磷菌肥主要是利用巨大芽孢杆菌发挥作用，将土壤中的不溶物转化为植物可吸收的营养成分。如不溶性磷向可溶性磷的转化。
由以上可以概括出微生物肥料的作用：首先，它制造和协助作物吸收营养，增加植物养分的供应量和土壤的肥力，从而促进植物生长、提高产量。其次，它增强了植物的抗病能力和抗干旱能力，降低和减轻了植物病虫害的侵袭。最后，它的使用，减少了化肥等含污染物的肥料的使用，从而净化土壤、修复土壤肥力，起到保护环境，促进我国农业可持续发展的作用。
四、微生物肥料应用现状及存在的问题
1.我国微生物肥料的应用现状
我国微生物肥料的研究、生产和应用已经有60多年的历史，期间经历了3次大的起伏，目前正处在第4次发展阶段。微生物肥料产业发展势头良好，约有500个企业，而且产品种类繁多，效果显著，深受广大用户的喜爱。但是微生物肥料的在使用上仍然存在一些问题，需要马上进行解决。
2.微生物肥料应用中存在的问题
2.1微生物肥料成本和价格较高
目前，由于我国微生物肥料生产技术较落后，生产工艺不是很完善，造成高投入、低产出的现象，而且成本和价格较高，这严重阻碍了种植户对微生物肥料的购买率，也降低了种植户使用微生物肥料的积极性。
2.2微生物肥料活菌数低，效果不稳定
微生物肥料存在的另一个问题就是微生物肥料活菌数低，效果不稳定。这是由于微生物肥料生产设备较低级，技术不纯熟，造成灭菌不彻底以及培养配方不正确而引起的。
2.3微生物肥料机械设备简陋，技术较落后
微生物肥料机械设备简陋，技术较落后，这严重阻碍微生物肥料质量的提高，质量得不到保证，这也阻碍了使用者对微生物肥料的使用。
2.4微生物肥料产品鱼龙混杂
一些生产微生物肥料的商家为了牟取暴利，不按照国家NY227 行业标准生产微生物肥料，造成市面上的产品鱼龙混杂。表现为肥料中仅含有大量的N 、P K 微量元素；或使用生长调节剂冒充微生物肥料，这对微生物肥料行业的发展是百害而无一利的。
五、对微生物肥料应用的建议
1.改善生产条件，降低生产成本
改善生产条件，降低生产成本，达到低投入、高产出的目的。同时，需要注意的是成品在储存时，条件要合理，以便活菌数能维持较长时间，使其效果稳定。
2.提高生产技术，完善生产设备
加强对专业工人的技术指导，提高生产技术，购买一批先进的生产设备，改善生产条件，提高微生物肥料的质量。
3.加强市场监督和管理，促进微生物肥料产业的发展
为了促进市场行业的有序进行，微生物肥料行业的健康发展，要加强微生物生产肥料市场的监督和管理，将微生物肥料的生产和使用纳入法制轨道，将市场进行规范化管理，以达到促进微生物肥料行业发展的目的。
六、微生物肥料的发展趋势
我国微生物肥料行业发展已经有60多年的历史，尤其是近十年得到了快速的发展，以后将会有更大的发展空间，功能上将会由单功能向多功能转变，菌种上将会出现更新换代，选用抗逆性高、能长时间储存的芽孢杆菌属，而且由单一菌种向复合菌种方面发展。
结束语：
在今后的日子里，微生物肥料将会有更大的发展空间，并且将会大受欢迎，它将成为绿色用肥而进入市场，成为新兴的绿色产业，拥有更加广阔的发展前景。
摘要：目的：探讨微生物检验在感染控制中的应用效果。方法：对照组住院患者根据其实际病情进行临床常规对症治疗与护理；研究组住院患者除上述措施外，进行感染情况监控措施，观察并记录两组患者医院获得性感染轻度、中度、重度发生情况及感染总发生率，将所得结果进行统计学分析。结果：研究组住院患者医院获得性感染发生率仅为9.00%，显著低于对照组患者医院获得性感染发生率67.00%，且P
关键词：微生物检验；感染控制；临床应用分析
本文将选取2012年1月至12月期间前来我院住院治疗的200例患者给予临床分组研究，从而探讨微生物检验在感染控制中的应用效果，为降低患者医院获得性感染发生率提供可靠依据，最终保障患者生活质量与生命安全，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 共选取200例住院患者，其中男患为121例、女患为79例，患者最大年龄为87岁，最小年龄为18岁，平均45.29±1.29岁，住院时间在7至48天之间，平均住院时间为17.36±2.28天。将我院200例住院患者以随机分组方式平均分为两组，即研究组（100例患者）与对照组（100例患者）。研究组与对照组住院患者在性别、例数、年龄、疾病类型、教育背景以及社会经历等方面无显著性差异（P>0.05）， 患者资料具有可比性。
1.2 方法 对照组住院患者根据其实际病情进行临床常规对症治疗与护理；研究组住院患者除上述措施外，进行感染情况监控措施，具体监控方法为实施微生物检，内容包括环境细菌学监测、细菌耐药性监测、医疗器械及用品细菌学监测、医护人员手部细菌学检测等。对研究组与对照组住院患者发生轻、中、重度医院获得性感染情况以及总发生率进行记录，给予统计学分析。
1. 3 统计学方法 使用SPSS13.0软件包进行统计学分析，以P
2 结果
由表一可知，研究组住院患者于我院就诊过程中发生获得性感染机率为9.00%，显著低于对照组发生率为67.00%，两组患者对比结果具有统计学意义（P
3 讨论
患者在医院进行治疗过程中发生感染且表现出相应临床症状的情况称为医院获得性感染。研究表明[1]，随着近年来抗生素类药物在临床广泛使用，以及介入治疗、放射性治疗不断发展，耐药性菌株的发生率也随之不断上升，对感染患者临床治疗与预后带来一定困难，因此，医院获得性感染已引起广大医务工作者高度重视。
住院患者微生物检验控制感染具体措施为[2]：①对医院各处环境进行及时充分的细菌监测，如手术室、病房、换药室等，采用生物指标控制法是最可靠的消毒灭菌指标检测方法，可准确判断环境消毒是否达标；②定期总结分析患者进行细菌药敏监测的结果，并及时向临床医师反馈；③对治疗所需医疗器械及用品进行细菌监测，定期抽样检查并进行无菌实验，待各项微生物检验结果合格后方可于临床治疗中使用；④医护人员手部细菌是重要的污染源，有研究表明，若医护人员与患者接触后未进行洗手措施，则其手部带菌率为100.00%，因此应制定严格的手部清洗规范，并定期对医护人员手部进行细菌检测；⑤患者若出现糖尿病、恶性肿瘤、烧伤以及骨髓移植等情况，则其机体免疫力较其他普通住院患者更低，因此属于医院获得性感染高危人群，医护人员应对其进行严密的微生物检测，必要时常规应用抗生素预防感染，尽量避免此类患者发生医院获得性感染。
综上所述，对住院患者进行临床常规治疗与护理措施的同时，给予微生物检验措施，能够有效预防患者医院获得性感染发生率，促进患者尽快恢复健康，保障患者生活质量及生命安全，值得临床推广应用[3]。
摘要：目的 建立八珍颗粒微生物限度检查方法并进行验证。方法 按《中国药典》2010年版一部的要求，对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证。结果 八珍颗粒可按常规法进行微生物限度检查。 结论 为保证药品的微生物污染能被检出，应对药品的微生物限度检查进行验证。
关键词：八珍颗粒 微生物限度检查 方法验证
八珍颗粒由党参、炒白术、茯苓、炙甘草、当归、炒白芍、川芎、熟地黄八种中草药组成，用于气血两亏，面色萎黄，食欲不振，四肢乏力，月经过多。 为保证微生物限度检查结果的可靠有效，应对检查进行方法验证，保证药品的微生物污染能被检出。
1.试药、仪器与培养基
1.1 试药
八珍颗粒（宁波利华制药有限公司，批号：130204）
1.2 仪器
电热恒温培养箱，电子天平，高压蒸汽灭菌器。
1.3 实验用菌种
大肠埃希菌[CMCC〔B〕44 102]、金黄色葡萄球菌[CMCC〔B〕26 003]、枯草芽孢杆菌[CMCC〔B〕63 501]、白色念珠菌[CMCC〔F〕98 001]、黑曲霉[CMCC〔F〕98 003]，以上均为购自山东省食品药品检验所的第三代菌种。
1.4 培养基
营养琼脂培养基（1103162），玫瑰红钠培养基（110222），营养肉汤培养基（101215），改良马丁培养基（110211），pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（1103232），北京三药科技开发公司；胆盐乳糖培养基（20130326），MUG培养基（20121126），青岛高科园海博生物技术有限公司。
1.5 供试液制备
取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
2.细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证
2.1 菌液制备
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，34℃培养24小时，取白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，26℃培养24小时，上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的菌悬液备用；取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，26℃培养7天，加入5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的孢子悬液备用。
2.2 细菌计数方法验证[1]
2.2.1 试验组 取1：10的供试液1ml注入平皿中，再分别注入1ml 2.1中制备好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌菌悬液，倾注营养琼脂培养基。
2.2.2 菌液组 各取1ml 2.1中制备好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌菌悬液，分别注入平皿中，倾注营养琼脂培养基。
2.2.3 供试品对照组取1：10的供试液1ml注入平皿中，倾注营养琼脂培养基。
2.3 霉菌及酵母菌计数方法验证[1]
2.3.1 试验组 取1：10的供试液1ml注入平皿中，再分别注入1ml 2.1中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
2.3.2 菌液组 各取1ml 2.1中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，分别注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
2.3.3 供试品对照组 取1：10的供试液1ml注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
各试验菌分别进行3次独立的平行试验，分别计算各试验菌每次实验的回收率。各组计数及试验组的菌数回收率见表1。
2.4 结果 表1显示5株试验菌株的3次回收率均高于70%，八珍颗粒可用常规法进行细菌、霉菌及酵母菌计数。
3 控制菌检查方法验证[1]
3.1 菌液制备 取大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，34℃培养24小时，上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的菌悬液备用。
3.2 供试品组 取1：10供试液10ml接种至100ml胆盐乳糖培养基中， 34℃培养24小时，取上述培养物0.2ml至5mlMUG培养基试管中，于5小时、24小时在366nm紫外光下观察；沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，观察液面颜色。
3.3 试验组 取1：10供试液10ml、3.1中制备好的大肠埃希菌菌悬液1ml（50-100cfu）接种至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
3.3 阳性对照实验 取3.1中制备好的大肠埃希菌菌悬液1ml（50-100cfu）至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
3.4 阴性对照实验 取pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
观察结果见表2
3.5 结果 试验组检出大肠埃希菌，表明八珍颗粒可用常规法进行控制菌检查。
4 讨论
通过方法验证，八珍颗粒可以采用常规平皿法进行细菌、霉菌和酵母菌计数，可用常规法进行控制菌检查。由于微生物限度检查易受试验条件的影响，中国药典规定要进行方法验证，以确保在检验条件下被污染的微生物能被检出，因此所有药品的微生物限度检查均需进行方法验证，确保所用方法适用于该药品的微生物限度检查。
【摘 要】对微生物传感器快速测定法准确度和精密度进行测试。通过用微生物传感器快速测定法和稀释接种法对质控样及水样测试比对，结果表明两种测试方法的相对误差、相对偏差无明显差异，均符合国家标准质控要求。微生物传感器快速测定法克服了稀释接种法耗时长的缺点，具有测定直接，操作简便等优势。
【关键词】BOD；微生物传感器快速测定法；稀释接种法
作为水体有机物污染的重要指标之一的生化需氧量的测定，传统方法是稀释接种法，此法要在测定五日后出结果耗时长，且它的操作过程涉及稀释、培养、滴定等步骤较复杂。而微生物传感器快速测定法相对简便快捷，本文就该两种方法对质控样及实际水样做了测定，对两种方法测定结果进行比较。
1.微生物传感器快速测定法测定BOD原理
测定水中BOD的微生物传感器是由氧电极和微生物菌膜构成，其原理是当含有饱和溶解氧的水样进入流通池中与微生物传感器接触，水样中溶解性可生化降解的有机物受到微生物菌膜中菌种的作用，使扩散到氧电极表面上氧的质量减少。当水样中可生化降解的有机物向菌膜扩散速度（质量）达到恒定时，此时扩散到氧电极表面上氧的质量也达到恒定，因此产生了一个恒定电流。由于恒定电流与水样中可生化降解的有机物浓度的差值与氧的减少量存在定量关系，据此可换算出水样中生物化学需氧量。
2.稀释接种法测BOD的原理
水样在20℃±1℃培养箱中培养5天，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为BOD5值，以mg/L表示。
3.校准
稀释接种法是通过测定水样培养前后溶解氧的量来测定BOD值，而微生物传感器是利用固定在传感器上的菌膜和水中有机物作用所消耗的溶解氧进行BOD的测定，水样与菌膜接触的时间、微生物生长周期以及活性的变化等都对测定结果有直接影响，所以每批次测量前必须用标准物质对微生物传感器进行校准并定期更换微生物膜。
4.测定结果讨论
4.1质控样测定结果比较
分别用微生物传感器快速测定法与稀释接种法测定质控样1（22.7±3.4（mg/L）），同时平行测定七次实验结果见表1、表2。
4.1.1精密度、准确度测试结果分析
由表1可知：浓度为22.7±3.4（mg/L）的样品，微生物传感器快速测定法得出平均值为23.64mg/L，标准偏差为0.7214mg/L，相对标准偏差为3.05%，相对误差为4.14%。稀释接种法得出平均值为23.78mg/L，标准偏差为0.3425mg/L，相对标准偏差为1.44%，相对误差为4.76%。
4.1.2相对偏差
由表2可知用微生物传感器快速测定法与稀释接种法测得的BOD值，其相对偏差在0.21%—2.39%之间都在国家标准质控要求的范围以内，且两种方法测量的相对偏差和相对误差无显著差异。
4.2实际样品测定结果比较
表3 两种方法所测地表水各实际样品结果比对
由表3数据可知，用微生物传感器快速测定法与稀释接种法测得实际样品的BOD值，其相对偏差在0.00%-3.23%之间，都在国家标准质控要求的范围以内，且两种方法测量的相对偏差无显著差异。
4.3小结
从实验结果来看，用微生物传感器快速测定法与稀释接种法测量BOD的准确度和精密度无显著差异，且都在国家标准质控允许的范围内，微生物传感器快速测定法用时短，效率较高，药品用量较小，取样量较小，克服了稀释接种法操作繁琐、工作量大、试剂要求多等缺点，具有操作简便、测量直接快速等优点，且测定结果与稀释接种法无显著差异，有可推广性。
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