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关键词：烟草工业；物流；一体化服务；管理评价体系
中图分类号：F426.8 文献标识码：A 文章编号：1001-828X（2014）09-0096-01
引言
随着社会经济的快速发展，烟草行业也在销售、生产、物流方面寻求创新和进步。随着行业竞争的加大和禁烟活动的进行，烟草行业面临着空前挑战。对烟草工业中的物流进行改进能够在很大程度上提高烟草企业的竞争实力，建构烟草物流的行业标准和管理机制成为了提高烟草物流服务质量和管理效率的重要途径。
一、一体化服务的概念
“一体化服务”是近些年来兴起的概念，它是在“产品服务化”潮流中与“服务供应链”概念融合而被提出的，注重产品的服务性，重视行业供应链的整体互动。在对行业价值链进行优化时，还需要对物流服务后向一体化、横向一体化和前向一体化进行革新，以使消费者、零售商、商业企业和工业企业的利益实现最大化。
二、烟草工业中的物流一体化服务评价管理体系
在烟草行业中推行一体化服务评价管理体系，对烟草行业具有重要影响。本文将对这一评价管理体系的模型和实施策略进行介绍。
2.1 烟草工业物流一体化服务评价管理体系模型
在对烟草工业物流一体化服务评价管理体系进行建立时，应引入“事前预警、事中控制、事后改进”的管理理念，应将改进、追溯、评价、规范等关键物流环节使用科学的管理方法连接起来，并将这一评价管理体系运用到整个烟草行业的管理服务中来。
烟草工业物流一体化服务评价管理体系模型包括三部分：智能追溯、服务考评、服务规范。这些环节在这个模型中都是很关键的，环环相扣，共同构成了一体化服务的管理理念。
在烟草的物流配送中，其配送中心的服务规范的意义在于：1.对烟草物流服务提出引导性规范，提出了“事前规范预警”，能够在事前对物流服务进行规范；2.物流配送业务流程是与物流服务的评价是有密切联系的，是以之为基础构建起来的。能否成功实行服务考评制度，其关键在于要建立完善的评价指标体系，在供应链、KPI、平衡计分卡等理论的指引下，综合烟草物流的特点以及ISO、服务规范等对物流服务的质量要求，建立起完善的、切实可行的评价方法。在服务评价结果的管理上，要对其评价结果进行追溯管理，以实现“事后改进”。
在这个服务评价管理系统中，构成了一个循环回路，后向环节以前向环节为基础，前向环节依据后向环节进行改善，并提出改进方法和改进方向，不断优化一体化服务体系，实现动态的服务评价管理。
2.2 管理体系中的重要环节
2.2.1 烟草行业物流规范
烟草行业物流规范中对烟草物流服务的质量和效率提出了合理科学的保障、警示、指导和支持。物流规范对烟草的“配送”、“分拣”、“仓储”等环节都有重要的支持和规范作用，以基本完成物流服务任务为前提，对烟草工业中所涉及的物流环节的安全、人员培训、投诉建议等都进行了流程和任务上的规定。烟草工业中的物流业务，不仅要从生产实际出发，还要对其可行性、全面性、细致性进行深入探讨和研究，避免在管理中出现晦涩、片面和粗犷的管理方式，提升烟草物流一体化服务的质量。
2.2.2 烟草行业物流服务评价指标
服务评价指标是烟草工业物流一体化服务体系的核心，是对“事中控制”进行管理的主要标准，是实现一体化服务的关键所在。建立起来的一体化服务评价指标体系应该具有较为良好的定性指标和定量指标，具有较高的可比性、可行性和较为全面的评价标准。评价指标应以科学理论为导向，基于实践，对烟草生产和配送过程中的物流服务进行管理。除此之外，还应注意对各项指标的细化，对应依据指标的性质和指标的巨细程度对指标进行合理细化，并标明合格标准与评判方法。
2.2.3 烟草行业评价结果与智能追溯管理
制定和实现物流一体化服务评价管理体系不是目的，而是一种手段，其目的在要提高烟草物流的质量，提升烟草物流的服务效率。在对该系统进行实施和改进时，应注重发现问题、分析问题、解决问题，注重对评价结果的追溯，寻找出物流效率提高或下降的原因，并给予合理和及时的解决。
三、实行烟草工业物流一体化服务评价管理系统的措施
在烟草物流中实施一体化服务评价管理体系，需要注意：
应该网络信息技术，充分发挥计算机的功能，对管理实行标准化操作；
对管理实行智能化和自动化，开发和使用专用的物流软件，对物流数据信息进行记录、反馈、统计和分析；
聘用和培养综合性与专业型人才，组建管理小组专门对物流服务的评价和组织进行管理。
方法：选取72例患者随机分为两组，对照组给予常规药物和无创通气治疗，研究组在此治疗基础上加服益气活血化痰的中药。比较两组治疗后效果，包括动脉血气中pH，PaCO2，PaO2的改善情况，综合疗效及住院天数。
结果：研究组总有效率为91.18%；对照组总有效率84.38%，两组治疗前后的pH无明显变化，但研究组较对照组在PaCO2，PaO2指标的改善程度上要更为明显，研究组的住院天数较对照组明显缩短（P
结论：益气活血化痰法联合无创辅助通气治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期呼吸衰竭患者，有效地借助中医优势，取得了中西医互补的作用效果，提高了慢性阻塞性肺疾病急性加重期呼吸衰竭治疗的临床效果。
关键词：无创辅助通气 益气活血化痰法 慢性阻塞性肺病 呼吸衰竭
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.11.532
【中图分类号】R2 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）11-0314-02
慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并呼吸衰竭一直是临床上的难治之症，以往惯用有创机械为患者建立人工气道，但鉴于有创机械存在的各种损伤和并发症，患者也会承受一定的痛苦而备受争议；无创机械通气的虽能减少患者的不适感，但要想发挥疗效，还得需要一定的呼吸中枢敏感性和呼吸肌的力量配合完成。本研究的目的借助中医的手段，通过中西医互补的方式对患者进行对照性的治疗，通过治疗手段和效果的比较，来提高治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期呼吸衰竭的临床疗效。具体是将益气活血化痰法与无创机械通气相配合治疗对患者进行治疗，对临床疗效、住院天数等数据进行比较，使中医药治疗与机械通气治疗“双剑合璧”，达到更为理想的治疗效果。
1 资料与方法
1.1 一般资料。收集2011年9月至2012年12月在我院呼吸内科进行治疗，符合临床诊断标准的住院病人72例，随机将病人分为两组，研究组和对照组均为36例。研究组男27例，女9例，平均年龄71.43±7.6岁，其中包括11例I型呼吸衰竭，25例II型呼吸衰竭；对照组男30例，女6例，平均年龄72.7±9.5岁，其中15例I型呼吸衰竭，21例II型呼吸衰竭。两组患者的平均年龄和性别分布无显著性差异，P>0.05，具有可比性。
1.2 方法。两组患者均服用抗生素、化痰药及支气管解挛剂等常规药物，同时接受无创通气治疗。吸入氧的浓度为30%。每次通气2小时，每天2次。
研究组在以上的治疗基础之上，还要同时服用活血化痰中药和保元汤。主要成分包括党参、茯苓、桔梗、黄芪、桑白皮、陈皮、法半夏、白术、补骨脂、杏仁、丹参、甘草、川芎。
每日开水冲服一剂，分3次服下，10天为一个疗程。
1.3 观察指标及判定标准。在治疗前对两组患者进行观察，得到中医证候积分 [2]，同时测动脉血气中的pH值，血液中氧气分压PaO2和二氧化碳分压PaCO2。治疗后的第3天和第10天以同样方法进行测定，观察动脉血气是否改善、中医证侯积分及患者住院天数的变化。
临床判定的标准参照《中药新药临床研究指导原则》来拟定 [3]。具体等级分为显效、有效和无效。其中临床症状及体征有明显的改善，证候积分减少70%以上为显效；临床症状及体征均有好转，证候积分减少30%以上的为有效；临床症状及体征均无明显改善，证候积分减少小于30%的视为无效。
1.4 数据处理。采用SPSS13.0统计软件进行数据的分析，各项指标采用X±S表示，组间数据采用t检验。P
2 结果
2.1 两组动脉血气中pH，PaCO2，PaO2的比较。两组患者在治疗前后的pH无明显差异；两组治疗后的PaCO2发生明显降低，而PaO2发生明显升高（P
2.2 中医证候疗效评价。两组总疗效的比较结果，研究组36例，显效21例，有效12例，无效3例，总有效率为91.67%；对照组36例，显效11例，有效16，无效9例，总有效率75%。两组的临床疗效具有统计学差异。具体数据见表2。
2.3 住院天数比较。研究组住院天数15.92d，对照组住院天数19.21天，结果显示研究组的住院天数明显少于对照组，数据有统计学意义（P
表1 两组动脉血气中pH，PaCO2，PaO2的比较（X±S）
注：与0天相比，P
表2 两组总疗效比较（X±S）
注：与0天相比，P
3 讨论
根据中医学的观点，气虚是导致慢性阻塞性肺疾病反复发作的主要原因，瘀血和痰浊等症状则是慢性阻塞性肺疾病的主要病理因素。益气活血化痰方配合保元汤就是针对患者气虚的根源所拟定的中药配方，方中君药选用黄芪、党参起到补益肺脾的作用；法半夏、茯苓、陈皮能够起到化痰之功效；臣药选择丹参、川芎，能够活血化瘀；配以宣肺化痰的桔梗，桑白皮、杏仁和甘草，将补气药与活血化痰药进行了巧妙融合，达到标本兼治的目的。
本研究采用益气活血化痰方配合无创机械通气治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期的呼吸衰竭患者，与以往单纯采用西医常规药物的治疗方法相比，本方法具有更高的治疗有效率，PaCO2和PaO2等血气指标有较大程度的改善，不仅减少了患者的痛苦，也通过缩短患者的住院天数减轻其经济负担。说明中西医结合的益气活血化痰法配合无创机械通气治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期呼吸衰竭的治疗是有重要意义的。
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【摘要】 目的 研究分析青岛地区EB病毒(EBV)相关胃癌及鼻咽癌组织中EBV主要潜伏期编码基因启动子甲基化状态。方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)及亚硫酸氢盐基因组测序法(BGS)，分析32例EBV相关胃癌及20例EBV阳性鼻咽癌标本中编码EBV核抗原EBNAs基因的启动子Cp、Wp、Qp以及LMP1和LMP2A编码基因启动子的甲基化状态。结果 EBV相关胃癌及鼻咽癌肿瘤标本中EBV编码基因启动子的甲基化状态与肿瘤细胞的潜伏感染类型一致：Cp和Wp呈高甲基化状态，而Qp未发生甲基化;2种EBV阳性肿瘤标本中LMP1和LMP2A编码基因启动子甲基化状态有所不同，两者在EBV相关胃癌组织甲基化程度明显高于其在EBV阳性的鼻咽癌(χ2=19.15、11.01，P
【关键词】 疱疹病毒4型，人;胃肿瘤;鼻咽肿瘤;DNA甲基化;启动区(遗传学)
[ABSTRACT] Objective To study and analyze the methylation status of major EpsteinBarr virus (EBV) latency promoters in EBVassociated gastric carcinoma (EBVaGC) and nasopharyngeal carcinoma (NPC) in Qingdao area. Methods Methylation status of specific CpG sites of Cp， Wp， Qp， LMP1 promoter (LMP1p) and LMP2A promoter (LMP2Ap) was systematically detected in 32 EBVaGCs and 20 NPCs by bisulfite genomic sequencing (BGS) and methylationspecific PCR (MSP). Results The methylation status of these promoters in EBVaGC was consistent with NPC. Wp and Cp were hypermethylated， whereas Qp was unmethylated; The methylation status of LMP1p and LMP2Ap in EBVaGC was different from NPC: the methylation rates of LMP1p and LMp2Ap in EBVaGC were significantly higher than those in NPC (χ2=19.15，11.01;P
[KEY WORDS] herpesvirus 4， human; stomach neoplasms; nasopharyngeal neoplasms; DNA methylation; promoter region (genetics)
EB病毒(EBV)属疱疹病毒科γ疱疹病毒亚科成员，95%以上健康成人携带EBV，与人类多种肿瘤如鼻咽癌、BURKITT淋巴瘤、HODGKIN病、胃癌等密切相关[12]。不同EBV相关肿瘤组织和EBV阳性细胞系中病毒基因的转录表达形式有所不同，在EBV潜伏感染细胞中，可表达的病毒基因有10多种，如EBV核抗原(EBNA)1、2、3A、3B、3C和LP，潜伏膜蛋白(LMP)1、2A和2B，EBV编码的小RNA(EBER)1和2以及BARF0的转录产物。根据EBV潜伏期基因表达形式不同分为潜伏Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型3种潜伏类型。EBV相关胃癌和BURKITT淋巴瘤组织均可以检测到潜伏期基因EBNA1、EBERs、LMP2A、BARF0的转录表达，为潜伏Ⅰ型。除了上述基因以外，在鼻咽癌组织、HODGKIN病中还可检测到LMP1的表达者为Ⅱ型潜伏。体外EBV永生化的B淋巴母细胞系(LCL)可检测到包括6种EBNAs和3种LMPs等在内的大部分EBV潜伏期基因的表达，称为Ⅲ型潜伏。研究表明，EBV相关胃癌及鼻咽癌组织中病毒基因表现为限制性表达，推测EBV可能通过表观遗传机制调控病毒基因启动子，尤其是通过其甲基化状态来调控病毒基因的表达[3]。研究显示，EBV编码基因启动子序列中CpG位点甲基化可抑制相应基因的表达，但这些研究主要集中在淋巴细胞来源的EBV阳性肿瘤和细胞系。本实验选择上皮来源的EBV相关胃癌和EBV阳性鼻咽癌作为研究对象，检测其EBV主要潜伏期基因启动子甲基化状态，为深入探讨EBV相关肿瘤的发生机制及防治提供实验基础。
1 材料和方法
1.1 细胞系
EBV阳性Akata、Raji和B958细胞系由日本鸟取大学医学部生体情报学教室西连寺刚教授惠赠，分别为潜伏Ⅰ型、潜伏Ⅲ型Burkitt淋巴瘤细胞系，EBV永生化的潜伏Ⅲ型LCL细胞系用作该实验的对照细胞。上述细胞用含有体积分数0.10的胎牛血清、105 U /L青霉素和100 mg /L链霉素的RPMI 1640营养液，于37 ℃、体积分数0.05的CO2培养箱中培养。
1.2 肿瘤标本
新鲜胃癌组织和石蜡包埋鼻咽癌组织取自青岛大学医学院附属医院﹑蓬莱市人民医院和烟台毓璜顶医院。采用原位杂交检测石蜡组织切片中EBV编码的小分子非多聚腺苷酸EBER1的转录[4]，筛选出32例EBV阳性胃癌和20例EBV阳性鼻咽癌标本。
1.3 DNA提取
采用酚氯仿异戊醇抽提法常规提取新鲜胃癌组织DNA，采用QIAamp DNA FFPE试剂盒提取石蜡包埋鼻咽癌组织DNA，具体操作步骤按试剂盒(QIAamp tissue kit， Qiagen， Hilden， Germany)说明进行。
1.4 DNA处理
取30 μL上述提取的组织DNA (2～5 μg)，加33 μL新鲜配制3 mol/L的NaOH溶液混匀变性，置37 ℃水浴15 min;将新鲜配制的亚硫酸盐溶液(2.4 mol/L 亚硫酸钠，pH 5.0～5.2;0.5 mmol/L 氢醌与3 mol/L NaOH的混合液)333 μL加入变性DNA中进行修饰，55 ℃避光孵育4 h。修饰后的DNA脱盐纯化处理按照DNA纯化试剂盒(Qiagen， Hilden， Germany)说明操作步骤进行;脱盐纯化的DNA溶于50 μL TE缓冲液中，室温下静置5 min。再加入3 mol/L的NaOH 5.56 μL，37 ℃水浴15 min，使其脱磺化基团。将纯化后DNA溶解于100 μL TE缓冲液中，-20 ℃保存备用[5]。
1.5 甲基化特异性PCR(MSP)
以亚硫酸氢盐修饰的组织DNA作为模板进行MSP，甲基化特异性引物、未甲基化特异性引物以及MSP产物大小见表1，其中Wp和Cp特异性引物参考文献[56]设计，Qp、LMP1 和 LMP2A启动子特异性引物采用MethPrimer软件进行在线设计。 PCR反应体积为25 μL，包括DNA模板2 μL，1.25 U热启动酶TaKaRa，1.5 mmol/L MgCl2，0.2 nmol/L dNTP 和0.6 mmol/L引物。反应条件：95 ℃预变性5～10 min;然后95 ℃变性30 s，最适温度退火30 s，72 ℃延伸1 min，共38个循环;最后72 ℃延伸10 min。扩增产物置20 g/L的琼脂糖凝胶上电泳，紫外线凝胶成像系统记录分析结果。EBV阳性Akata、Raji和B958细胞系DNA 作阳性对照，EBV阴性Ramos细胞DNA作阴性对照。
1.6 亚硫酸盐基因测序
为进一步检测LMP1和LMP2A启动子区域CpG位点具体甲基化状态，并验证MSP结果，参考文献设计引物行亚硫酸盐基因组测序(BGS)[78]，该引物序列位于MSP引物序列外侧，见表2。PCR反应体积为25 μL，包括亚硫酸氢钠修饰的DNA模板2 μL，1 U热启动DNA聚合酶TaKaRa，1.5 mmol/L MgCl2，0.2 nmol/L dNTP和0.6 mmol/L 引物。反应条件：95 ℃预变性5 min;然后95 ℃变性30 s，最适温度退火30 s，72 ℃延伸1 min，共38个循环;最后72 ℃延伸10 min。扩增产物置20 g/L的琼脂糖凝胶上电泳，紫外线凝胶成像系统观察结果后送测序。表1 甲基化特异性PCR引物启引物类型核酸序列表2 BGS测序引物引物类型核酸序列B958对应序列退火温度
1.6 统计学分析
采用PPMS 1.5[9]统计软件进行统计学分析，计数资料的比较采用校正χ2检验及χ2检验。
2 结 果
2.1 Cp、Wp及Qp甲基化检测
MSP检测结果显示，B958细胞中未检测到Cp的甲基化，Raji细胞中Cp高甲基化，但在Akata细胞系中同时检测到甲基化和未甲基化的Cp。Raji和Akata细胞系中Wp呈高甲基化，但在B958细胞系中则呈部分未甲基化现象;3种细胞系中均未检测到Qp的甲基化。本实验检测的52例EBV阳性肿瘤组织均表现为Cp和Wp高甲基化状态，而Qp呈低甲基化状态。MSP检测3种细胞系和部分EBV阳性标本Wp、Cp及Qp甲基化状态的电泳结果见图1～3。
2.2 LMP1基因启动子甲基化检测
MSP检测结果显示，32例EBV相关胃癌组织中LMP1启动子均呈高甲基化状态;20例鼻咽癌标本检测到3种MSP结果类型，其中包括M型9例(45%)、U型6例(30%)，M+U型5例(25%)，结果见表3。图4为MSP检测2种EBV阳性细胞系和部分EBV阳性标本LMP1启动子甲基化状态的电泳结果。BGS检测结果显示：B958和Akata细胞系LMP1编码基因启动子区的25个CpG位点均没有发生甲基化;EBV阳性肿瘤组织的检测结果与MSP结果基本一致，除N43外，其余标本该区域25个CpG位点呈甲基化状态。见表4。
2.3 LMP2A基因启动子甲基化检测
MSP检测结果表明，在84.38% (27/32)EBV相关胃癌和40%(8/20)的鼻咽癌标本中，LMP2A编码基因启动子表现为高甲基化，结果见表3和图5。BGS检测的结果显示，B958和Akata细胞系LMP2A编码基因中启动子区的20个CpG位点均没有发生甲基化;EBV阳性肿瘤组织的检测结果与
Q7、Q31、Y13A 为EBV阳性胃癌标本，N31、N43为EBV阳性鼻咽癌标本，Akata、Raji、B958为EBV阳性细胞系。M代表采用甲基化特异性引物M1/M2的PCR结果，U为采用甲基化特异性U1/U2引物的PCR结果。表3 MSP检测EBV编码基因启动子甲基化状态启动子类型甲基化类型EBVaGC(例)EBV阳性NPC(例)
MSP检测结果基本一致。见表4。BGS测序结果证实，5例MSP结果呈U+M的EBV阳性肿瘤标本(Q215、DA53、DA78、DA93和N36)中，LMP2A启动子区域CpG位点呈部分甲基化。在3例EBV阳性胃癌标本(DA53、DA78和DA93)中，LMP2A编码基因部分CpG位点存在2种不同的甲基化形式，即甲基化(C)与未甲基化(T)同时存在(图6)。
2.4 LMP1和LMP2A基因启动子在EBV阳性胃癌和鼻咽癌中的甲基化率
EBV阳性胃癌组织中LMP1和LMP2A基因启动子甲基化阳性率明显高于鼻咽癌组织，差异有显著性(χ2=19.15、11.01，P
图5 MSP检测LMP2A编码基因启动子甲基化电泳结果
图中序列276对应表4中的CpG位点是14，287对应的CpG位点是15，310、313、315对应的CpG位点分别是16、17、18。如图所见位点14、15存在两种波峰，提示C与T同时存在;位点16、17、18仅一种波峰，即C。表5 EBV阳性胃癌和鼻咽癌中LMP1p和LMP2Ap甲基化率的比较组 别nLMP1p阳性(例)阴性(例)甲基化率
3 讨 论
基因表达调控区域的DNA序列发生化学修饰可影响基因表达，DNA甲基化是最重要的修饰形式之一。本实验证实，EBV相关胃癌和EBV阳性鼻咽癌组织中，病毒基因表达调控区DNA的甲基化与EBV潜伏期基因的表达密切相关。
编码EBV核抗原EBNAs的启动子包括Wp、Cp和Qp，其中Wp和Cp为EBNAs的共同转录启动子，可转录合成全部6种EBNAs mRNA，而Qp为EBNA1的专有启动子，选择性转录合成EBNA1 mRNA。EBNAs在EBV相关胃癌及鼻咽癌组织中表达类型相同，仅EBNA1表达，其表达受Cp、Wp和Qp等3种启动子调控[10]。实验证实，Wp和Cp引物序列所含CpG位点的甲基化状态可很好地反映启动子的甲基化状态[56]。本研究MSP检测结果显示，在EBV相关胃癌及鼻咽癌组织中Wp和Cp表现为高甲基化，而Qp则未发生甲基化，表明潜伏Ⅰ和Ⅱ型EBV阳性肿瘤组织中EBNA1的表达由未甲基化的Qp启动[1112]。由此可见，启动子区域CpG位点甲基化状态与EBV基因表达密切相关，并呈反向关系，即DNA甲基化一般抑制基因表达;而非甲基化一般与基因的活化相关。
通常认为在潜伏Ⅲ型细胞系中，EBNAs的表达受Wp/Cp调控，而Qp处于沉默状态。本实验结果显示，在B958细胞系中Wp、Cp和Qp均呈低甲基化状态，表明EBNA1的表达由三者共同调控，其他EBNAs的表达则由Wp/Cp调控。研究证实，Raji细胞所有Ⅲ型潜伏基因均表达，理论上6种EBNAs mRNA的转录表达是由Wp/Cp启动，但本研究显示Raji细胞系中Wp和Cp呈高甲基化状态，提示EBNA1的表达受Qp调控，其他EBNAs的表达不受Wp/Cp调控，推测Raji细胞系中EBNAs的表达存在其他调控机制。研究显示，EBV阳性BL细胞系在体外培养时易发生表型改变，如EBV核抗原表达的改变，早期传代病毒基因表达呈高度限制性，仅EBNA1表达;随着传代次数的增多晚期至少表达9种不同的病毒蛋白(EBNA1、2、3A、3B、3C，LP，LMP1、2A、2B)[1314]。我们的结果也显示，Akata细胞系Cp区域有少量CpG位点未发生甲基化，而且Akata细胞系LMP1和LMP2A编码基因启动子的甲基化状态也反映出其在体外培养过程中发生了表型改变。推测体外细胞培养条件与人体内环境明显不同，缺乏免疫监视，对细胞系的研究可反映但不能代表原始肿瘤组织中EBV主要潜伏期编码基因启动子的甲基化状态，因此有必要对原始肿瘤组织标本进行研究。
BGS检测LMP1和LMP2A启动子区域CpG位点甲基化结果表明，2种上皮来源的EBV阳性肿瘤组织中存在病毒基因启动子不完全甲基化现象。1996年，ROBERTSON等[14]在对EBV阳性BURKITT淋巴瘤和HODGKIN病肿瘤组织中Cp甲基化状态进行研究时就发现存在不完全甲基化现象。我们的前期研究结果也证实，LMP1和LMP2A在EBV阳性胃癌组织中表达不同，其中LMP1不表达，而LMP2A仅在部分标本中表达[15]。FAHRAEUS等[16]采用免疫印迹法检测到LMPs在约71%鼻咽癌组织(标本来源中国)中表达。本研究结果显示，2种EBV阳性肿瘤组织中LMP1和LMP2A编码基因启动子的甲基化状态有所不同，在EBV相关胃癌标本所有的LMP1基因启动子和绝大部分(27/32)LMP2A编码基因启动子呈高甲基化状态;而在鼻咽癌组织中，LMP1和LMP2A编码基因的甲基化程度明显下降，高甲基化率分别为45%和40%，表明EBV相关基因调控区域DNA甲基化状态是基因表达的重要调节机制之一。BGS检测结果所示的部分EBV阳性胃癌组织标本中部分CpG位点U与M同时存在，我们推测其原因有两种：一是等位基因甲基化情况不一致;二是病毒基因组DNA甲基化状态不同(病毒部分DNA甲基化而另一部分DNA未甲基化)。
总之，EBV阳性胃癌及鼻咽癌组织中，EBV主要潜伏期编码基因启动子区域CpG位点甲基化状态与其表达呈负相关，EBV基因的高甲基化状态有助于其逃避免疫活性个体的免疫系统的监视，并长期存在宿主细胞内，其在肿瘤的发生、发展中的具体作用机制有待于进一步研究。
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中考生：补习弱项是关键
专家建议，寒假中，要客观地对期末考试试卷进行分析，看看哪些题失了分，弄清失分原因。寒假学习中要多补习“瘸腿科目”，对薄弱环节进行分析，哪科没考好，冷静分析原因，判断该科是不是弱科。如果是，则要抓紧寒假时间，多补弱科基础知识，避免中考时“瘸腿科目”拉分。另外假期既不要睡懒觉，也不要开夜车，要制定一个学习计划，以保证每科的学习时间，每天至少进行三科的复习，文理分开，擅长、喜欢和厌恶的科目交叉进行。记住，完成作业不是目的，根据作业查漏补缺，或翻书再复习一下薄弱环节才是根本。有解决不了的问题，千万不要钻“牛角尖”或置之不理，可以打电话请教一下老师或同学。
针对英语的复习，成绩落后生要静下心来，加强概念、单词和公式的记忆，尽量多做历年中考真题。在做完一套真题试卷后，要及时核对答案，看看哪些题目丢分，弄清丢分原因。通过做真题可了解中考命题范围、题目深浅以及相关题型。同时，还要把做错的题记录在错题集里，或用红笔做上记号，便于下一次复习。通过有选择性地做中考真题，可以体会和熟悉中考题型，同时对所学知识的“融会贯通”，使训练更有效。
高考生：巩固提高是关键
高三学生对最后一个寒假应该持何种态度，才能最大程度有利于备战高考呢?寒假是高三生自我调整、巩固提高的关键时期。寒假里，考生的学习将由在校时的被动学习变为完全靠主动学习。因此，考生要制订一套合适的学习计划和假期作息时间表，做到复习有计划，生活有规律。假期复习计划一方面包括学习知识内容的计划，;另一方面还包括整个假期的时间安排。以往，很多考生放假后早上不吃饭，睡懒觉，尽情地放松，平时的生物钟完全被打乱。开学后，这些考生很难适应正常的作息时间，从而直接影响了新学期的复习状态。专家认为，高三生在制订一份详细的作息时间表时，要把每天的学习任务、时间具体化。高三生寒假里要保持正常的作息时间，每天上午学习3个半小时，下午学习两个半小时。另外，每天还要坚持看半小时的新闻时事(电视或报纸)，并留出半小时的体育锻炼时间。
家长：要保证孩子张弛有度
寒假期间，学生和家长相处的时间多了起来。一些老师建议，假期中高考生的家长别忘帮助孩子制定明确学习目标，督促孩子进行体育锻炼。
新思路的专家提醒家长，家长要督促孩子完成好老师布置的作业，根据实际情况选择一些家教、辅导班，但要注意不要把孩子的假期安排得过于紧张，要给孩子一个张弛有度的假期。这个寒假，高三和初三的学生进入了“休整期”，不论平时成绩如何，高三和初三的每一个学生都有潜力。为什么有相当多的学生的潜力没有发挥出来?一个最主要的原因是心理素质不高。有的学生平时成绩很不错，但是一旦某次测验成绩不理想就一筹莫展，甚至想休学、退学、降级，家长和老师的规劝无济于事。也有的高三学生，为了迎接高考，家长硬逼着学习，晚上学到12点，早晨4点就起床，但仍没能考上理想的大学。家长认为只要学习时间长效果就会明显，殊不知这样却违背了大脑的运转规律。
一、加强教学管理，规范教学行为
1、严格岗位职责，加强教学常规检查。根据《肥城市初中学校教学管理规范和实施细则》，严格教学岗位、教学环节的检查巡视，杜绝随意空课、调课、占课、拖课现象，保证教学各项工作科学、规范运转。
2、科学制定计划，精心安排复习。要督促广大教师根据教学进度，及时结束新课，科学安排复习。学校要对各个学科、各位教师的复习计划进行督查，强化复习期间的教学秩序管理，切实杜绝随意性、放鸭式复习，确保复习的目的性、针对性、有效性，提高复习效益。
二、优化教学策略，提高教学效益
3、上好复习课，努力提高课堂效益。要重视复习课教学策略的研究，加强对复习课教学目标、教学重点、教学方法、实施策略等具体问题的研讨，努力通过凝聚集体智慧，构建自主高效的复习课教学操作模式，强化知识的联系，促进知识的迁移，实现能力的提升，充分激发学生的潜能，激活学生的思维，提高课堂45分钟的质量效益。
4、严禁题海战术，精细教学质量监控。要坚决摒弃靠题海战术、机械重复式作业提高质量的做法，努力优化提升习题、试题及作业水平，提高单位时间效益。各学校、各学科要把习题、试题和作业研究作为一个重要的课题，聚力聚智，常思常探，切实优化题目设计，精心作业布置，及时测试讲评，保证做到精练精批，反馈高效。
三、减轻学生负担，促进身心两健
5、加强作业研究，严格控制作业量。各单位要认真执行省规40条，严格控制作业量，保证学生充足的睡眠时间，杜绝超时超量布置校内作业和家庭作业，杜绝过量使用成套的单元试卷，杜绝盲目使用教辅资料，确实把作业的数量降下来，把作业的实效提上来。因作业量的问题引发社会及家长不满造成不良影响的，将追究学校领导及相关教师的责任。
6、加强生活指导，力促学生和谐发展。广大教师既要关注学生的学习状况，更加关注学生的身心健康。因此，要重视并加强学生的学习指导研究，引导学生科学合理地安排作息时间、调节心理，做到劳逸结合，身心两健，以良好的状态迎接期末考试。
四、科学统筹安排，部署好考试和放假工作
7、加强考风建设，发挥考试效能。各单位要利用主题班会，加强考风考纪建设，教育学生诚信考试。要充分发挥考试的诊断、激励和发展功能，认真评卷，做好成绩统计和质量分析，指导教师写好试题评价报告，在放假前做好试卷的讲评和修改完善。
一、科学合理地制定暑假活动计划
假期中任务繁多，想做的事情也很多。要把这些事情逐一筛选、调整，根据暑期时间合理安排，制定一份“暑假活动表”。一切活动应该严格按照“计划表”进行，但还是要注意劳逸结合。
二、认真复习，迎接奖学金考试
这个测试是暑假后初一下学期的一个总结，暑假中，要把初一下学期学习的所有内容认真复习一遍，还要制定一个“复习计划表”。争取测出好成绩。
三、培养自己的兴趣爱好，发展自己的特长
根据自己的兴趣爱好，积极参加学校组织的各种兴趣小组，如：绘画、书法、音乐、英语、信息技术，掌握一技之长，为将来的发展打下基础。
四、勤奋读书，注意积累，善于写作，灵活运用
【关键词】SO2;标准溶液;温度控制
测定环境空气中的SO2，一般采用HJ 482-2009《环境空气 二氧化硫的测定 甲醛缓冲溶液吸收―盐酸副玫瑰苯胺分光光度法》，该法主要测试原理是环境空气中的SO2通过采集器被甲醛缓冲溶液吸收后，生成稳定的羟基甲磺酸加成化合物，在样品中加入氢氧化钠溶液使加成化合物分解，释放出的SO2与盐酸副玫瑰苯胺作用，生成紫红色化合物，根据颜色深浅，用分光光度法测定。相比其他分析方法，甲醛法所用试剂无剧毒，价廉易得；对低浓度二氧化硫采样吸收率高；标准溶液和样品溶液稳定性好，即使在室温条件下也可长时间保持不易降解损失；采样吸收液的最佳温度范围宽比汞法易于控制等特点。缺点是：采样和分析技术虽然易于掌握，但是具体操作繁琐，对监测人员素质要求高。当前二氧化硫测定频繁，以建设项目环境现状监测为例，一个空气监测点位每天需测定一个日均值和四个小时值，如果监测点位较多，加上测定过程繁琐，监测人员难免会在实验中出现纰漏，影响分析结果。
《环境空气二氧化硫的测定甲醛缓冲溶液吸收―盐酸副玫瑰苯胺分光光度法》（HJ 482-2009）对采样和实验室分析的各个流程做出了详细的规定，并且放宽了校准曲线斜率的要求，相比《环境空气 二氧化硫的测定 甲醛缓冲溶液吸收―盐酸副玫瑰苯胺分光光度法》（GB/T 15262-94）难度有所降低，但是在实际操作中，对监测人员仍有较大难度，还有很多需要注意的地方，经长期开展实验工作证明，采取一定的措施，可以有效降低实验难度，提高数据准确性。
1、外购标准溶液降低实验难度
制备二氧化硫标准储备液，需要对亚硫酸钠溶液进行标定，然后计算二氧化硫标准储备液的质量浓度，整个标定过程十分重要，是关系到测定数据准确性的关键步骤。标定过程需要对硫代硫酸钠标准储备液和亚硫酸钠溶液进行标定，其操作过程和计算公式都较为复杂。我们由于人员缺乏和实验频率加大等原因，经过过成本核算，逐步开始采用环境保护部标准样品研究所生产的二氧化硫标准溶液进行试验，用手工配制标准溶液和外购标准溶液做出的校准曲线进行比对，两种溶液各做校准曲线20条，其中A0和a值都满足要求，外购标准溶液绘制校准曲线斜率在0.044±0.002范围内，手工配制标准溶液绘制校准曲线斜率18条在0.044±0.002范围内，另外两条在0.040~0.042范围内，全部40条校准曲线都满足HJ 482-2009标准关于质量保证和质量控制的要求。由于标准溶液浓度为100μg/mL可保存一年，浓度为10μg/mL可保存3个月，浓度为1μg/mL仅可保存1个月，可见高浓度的标准溶液更利于保存。同时，也应采购标准密码样品做为质控样品，对实验进行质量控制，进一步提高监测结果的准确率。因此，采用外购标准溶液开展实验，可以减少很多繁杂操作，并能得到很好的实验效果。
2、严格控制温度和时间。
《环境空气 二氧化硫的测定甲醛缓冲溶液吸收―盐酸副玫瑰苯胺分光光度法》（HJ 482-2009）表2中对显色温度和显色做出了相应的规定，魏卓立、曹威等人通过实验表明在18℃下，显色7分钟时，显色反应已进行完全，即可进行比色。但是通过实际工作中，发现在绘制校准曲线的时候，如果显色时间不充分，高浓度二氧化硫试样测得吸光值偏低，特别在低温度条件下，会影响到整个校准曲线的斜率值。因此建议在绘制校准曲线和测定高浓度样品的时候，应严格按照要求，给足显色反应的时间。同时，由于显色温度30℃的时候稳定时间仅为10分钟，因此在测试样品较多的情况下，有条件的实验室应该配备空调控制室温，没条件的实验室应严格控制水浴锅温度，使显色温度和室温保持3℃之内的差距。在室温较高情况下，若测定样品较多，须分批次检测，严格控制比色用时，以免影响测定结果。
3、玻璃仪器的清洗
实验生成的紫红色化合物不易清洗，在洗涤比色管的时候应认真仔细，避免PRA溶液残留，可以采用温水洗涤，加速显色反应，以颜色判定是否有残留试剂，同时还应避免用硫酸-铬酸洗液洗涤玻璃器皿，以免产生负干扰。由于因样品中SO2的含量差别较大，每次在测定时，都需认真清洗专用比色皿，使用前必须用蒸馏水和待测溶液对其进行认真清洗，以免样品之间产生干扰。
4、结论
（1）鉴于二氧化硫标准储备液标定过程非常繁琐，可外购标准溶液绘制校准曲线，大幅度简化实验步骤，配合外购密码样品，提高测试结果的准确度。
（2）温度控制是实验成功的关键条件之一，应当十分注意。应严格按照相关要求开展实验。
（3）实验产生的紫红色化合物应及时清洗，以免产生干扰。
参考文献
此外，在新学期开学之前，要好好的梳理一下上个学期学习的东西，为学习新知识做好准备。当然能够提前预习一下新学期的内容更好，但如果时间不充裕，复习比预习更重要。因为毕竟新内容老师会在课堂上讲，而上个学期的东西，可能要一直等到毕业总复习的时候才会再讲了。
接下来提分君为大家详细介绍一下要如何安排寒假的学习计划：
进行分析与定向，攻克薄弱环节
寒假毕竟不长，目标不宜太大、复习范围不宜太广。如果想真正有收获，一定不要贪多哟！适宜重点攻克薄弱学科、或某学科中的重点内容。重点夯实基础知识，查漏补缺，为考试打好坚实的基础！
在制定寒假复习计划之前要科学、准确地自我解剖、自我分析这一学年的学习状态即考试成绩，包括平时系列测试、期中考试成绩、期末考试成绩，其中以期末考试成绩为主，因为期末考试的信度比较高。
自我分析的目标包括两个方面，一是定位，二是定向。所谓定位，就是说期末考试后，全区有一个成绩统计，每个学生都可以知道自己总分的位置，你处在一个什么位置上?心里要十分清楚，这基本反映了你的实力。所谓定向，就是说你的优势学科是什么?你的弱势学科是什么?薄弱环节在哪儿?优势学科的优势原因是什么?
具体建议：没有舍弃就没收获!基础薄弱考生要记住：弱就弱在基础上!所以寒假的学习要抓基础知识、基本技能、基本方法。要抓非智力因素、信心、目标、意志、毅力、方法、心态。要多练，特别是中低档试题，要看、要想更要练。
合理规划时间，制定学习计划
放假后的第一件事，应该是整理出可利用的时间，做出时间安排表，以每一天为单位；接下来梳理自身学习情况，找出最需要提高或最想做的事，合理分配复习和预习时间，有针对性地制定假期学习计划。
每天有效学习时间最好保持在5-6个小时。可以根据自己的情况合理的规划一下，例如：早上2个半小时，中午2个半小时，晚上1个小时。学习时间最好固定在：上午8：30-11：30，下午14：30-17：30；晚上19：30-21：30。习惯比聪明更重要！只要你按照计划来，每天坚持，你的成绩不会没有进步的！相信你的假期一定会有意想不到的收获。下面是几个小Tips，供大家参考：
1、早晨合理安排30分钟读一读英语
2、利用上午2节课的时间分别独立完成2科寒假作业
3、中午适当午休，既不要睡懒觉，也不要开夜车。
4、和上午一样，利用下午的时间做些寒假作业，但不可一下子贪多。要均衡、科学安排。
5、自由时间可以干一些喜欢的事情，但要控制在半小时的时间里。
6、晚饭之前是自由活动的时间，可以看电视等，但要看看新闻。
7、读一些好的小文章，写日记或是读后感，或是精彩的摘抄
8、制定学习计划，主要是以保证每科的学习时间为主。若在规定的时间内无法完成作业，应赶快根据计划更换到其他的学习科目。千万不要总出现计划总是赶不上变化的局面。
9、晚上学习的最后一个小时为机动，目的是把白天没有解决的问题或没有完成的任务再找补一下。
10、每天至少进行三科的复习，文理分开，擅长/喜欢和厌恶的科目交叉进行。不要前赶或后补作业。完成作业不是目的，根据作业查缺补漏，或翻书再复习一下薄弱环节才是根本。
11、一定要预留出锻炼身体和休闲活动的时间。
大家上午好！今天，我演讲的题目是《期末考试，你准备好了吗？》时光荏苒，不经意间，五个月的时间转瞬即逝，本学期已经接近尾声，同学们马上就要迎来本学期的期末考试，相信同学们此时内心情绪会比较复杂。想到父母和老师殷切期望的眼神、想到同学们拼搏竞争的气势，同学们内心可能会有一些紧张；想到展现自我、验证自我的时刻即将到来，同学们可能会有一些兴奋；想到期末考试后那美好的假期，同学们可能也会有一些期待。期末考试的战鼓已经敲响，考验我们的时刻即将来临。同学们，你们准备好迎接挑战了吗？在此，我想对同学们提出以下几点建议。
一、端正态度，正确认识期末考试同学们要首先意识到，期末考试是对本学期学习情况的总结和检验，通过考试，使每位同学发现自己的学习态度、知识、方法等方面存在的问题，以便在下学期的学习中做出相应的调整，采取相应对策。另外，期末考试是对我们一种磨炼，考试，是每个学生必经之旅，在这个过程中，我们的意志在磨练和忍耐中变得坚强，我们的思想在经历和压力中走向成熟。因此，期末考试是促进我们成长、进步的重要阶梯，我们要将期末考试看做锻炼自己、考验自己的好机会，要以一种平和的心态应对期末考试。
二、制定计划，有侧重地复习《礼记》言：“凡事预则立，不预则废。”是指不论做什么事，事先有计划有准备，就更容易获得成功。高中课程繁杂，考试科目众多，尤其是期末考试，往往是对一整个学期学习效果的考察，考察范围广知识多。同学们首先要紧跟老师步伐，按照老师的要求和计划有序复习，这样才能抓住复习重点，不至于在茫茫学海中迷失方向。另外，由于个体差异的存在，每个同学也需要给自己量身打造一个个人学习计划。仔细分析自己的优势学科是什么，薄弱学科是什么，尤其要针对薄弱学科制定出背诵、做题等复习计划。计划要制定得合理，要有可行性，当然，更重要的是要严格按照计划复习，要将计划落到实处，绝不能做“思想的巨人，行动的矮子”。高中生活固然紧张，而有心人总能挤出琐碎时间加以利用，长期坚持，必有成效。“骐骥一跃，不能十步；驽马十驾，功在不舍。”按照计划稳扎稳打，敢于下苦功夫、笨功夫的人，方能有所收获。
三、科学复习，事半功倍科学有效的方法，可以让我们的复习、应考事半功倍。古人云：“取法乎上，仅得其中；取法乎中，只得其下。”讲的就是做任何事情都要讲究科学有效的方法。首先，要重视基础、不犯概念性错误。教材中的基础知识最具有生命力，只有夯实基础，我们才可能用有限的定义、定理、公式去应对无限变化的能力测试。其次，要重视纠错、不犯重复性错误。复习、检查的关键就是要纠错，我们要抓住错误、理清错误，确保不犯同类错误。再次，要重视规范、养成规范答题的习惯。“习惯决定性格，性格决定命运。”平时练习就要养成步骤清晰、要点全面、书写美观的答题习惯，考场上才能有效答题。
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